NF-κB抑制剂PDTC对人骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2019-11-07 08:47

【摘要】：目的:探讨NF-κB特异性抑制剂PDTC对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用不同浓度PDTC(25、50、100和200μmol/L)处理U266细胞,CCK-8法和活细胞计数检测U266细胞的增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-qPCR及Western blot检测PDTC处理前后DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表达;Western blot检测NF-κB(P65)、DNMT1、Bcl-2、cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平。结果:PDTC处理U266细胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266细胞增殖,作用呈浓度及时间依赖性;PDTC作用48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率呈浓度依赖性增高(P0.05),细胞被阻滞在G2期;DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低;Western blot结果显示PDTC可通过抑制NF-κB下调Bcl-2的表达,使cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加。结论:PDTC抑制NF-κB信号通路,通过诱导U266细胞凋亡从而抑制细胞增殖,其机制可能与抑制DNMT1的表达、阻滞细胞周期和启动凋亡途径有关。
【图文】：

Figure3．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells．图3流式细胞术检测PDTC对U266细胞周期的影响表1流式细胞术检测不同浓度PDTC对U266细胞周期的影响Table1．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells(%．Mean±SD．n=3)PDTC(μmol/L)G1SG2033．10±2．4361．80±3．155．10±1．075030．85±1．8455．65±2．3913．49±2．82＊＊10023．05±4．0652．98±1．6323．97±2．25＊＊＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．Figure4．TheapoptoticrateofU266cellsincreasedwiththeincreasingconcentrationsofPDTCfor48h．Mean±SD．n=3．＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．图4流式细胞术检测PDTC作用于U266细胞48h的细胞凋亡率组相比，PDTC组DNMT1的mＲNA表达降低(P＜0.01)。Westernblot实验结果显示，PDTC处理后DNMT1蛋白水平明显下降，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)。且随着PDTC浓度的增加，DNMT1蛋白水平呈逐渐降低趋势，在100μmol/L时差异较显著(P＜0.01)，，见图6。·1180·

Figure3．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells．图3流式细胞术检测PDTC对U266细胞周期的影响表1流式细胞术检测不同浓度PDTC对U266细胞周期的影响Table1．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells(%．Mean±SD．n=3)PDTC(μmol/L)G1SG2033．10±2．4361．80±3．155．10±1．075030．85±1．8455．65±2．3913．49±2．82＊＊10023．05±4．0652．98±1．6323．97±2．25＊＊＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．Figure4．TheapoptoticrateofU266cellsincreasedwiththeincreasingconcentrationsofPDTCfor48h．Mean±SD．n=3．＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．图4流式细胞术检测PDTC作用于U266细胞48h的细胞凋亡率组相比，PDTC组DNMT1的mＲNA表达降低(P＜0.01)。Westernblot实验结果显示，PDTC处理后DNMT1蛋白水平明显下降，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)。且随着PDTC浓度的增加，DNMT1蛋白水平呈逐渐降低趋势，在100μmol/L时差异较显著(P＜0.01)，见图6。·1180·

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