吉西他滨联合顺铂介入化疗对人肺癌A549细胞的动物实验研究

发布时间：2019-12-04 01:49

【摘要】：第一部分肺癌A549裸大鼠移植瘤模型的建立及应用目的::探讨裸大鼠肺癌A549高效移植瘤模型的建立方法,为进行肿瘤的体内相关介入研究提供实验基础。方法::肺癌A549细胞接种于裸小鼠右腋皮下,出瘤后制备单细胞悬液和组织块分别接种和塞入裸大鼠耳后皮下,共分初次培养细胞成瘤组(A组)、二次单细胞悬液成瘤组(B组)和二次组织块成瘤组(C组)三种方法成瘤,每组6只裸大鼠,观察3组各裸大鼠的一般情况、成瘤情况、移植瘤的生长情况及病理表现,并用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果::在移植后4-5天后,在注射或移植处触及结节,7天后呈直径4-5mm,14天后肿块直径10-12mm,呈分叶状、质实、边界清、活动度可、无液化,28天后肿块增大伴中央液化。A、B、C组的出瘤率分别为:52.3%、63.4%和100%,A组与C组之间差异有显著性(P0.01),3组中C组的出瘤率显著高于另外两组,细胞增殖块,移植瘤的变异小。移植瘤病理学镜下观:肿瘤细胞排列紊乱,细胞核异形明显,核质比例增大,染色质深且粗,核大深染,异常核分裂相易见。细胞周期分析显示A、B、C组的细胞增殖指数分别为:(32.31±8.72)%、(47.68±4.72)%和(48.61±5.06)%,显示A组的增殖指数与B组和C组之间差异有显著性(P0.05),而B组与C组之间差异无显著性(P0.05)。C组的细胞S和G2/M期比例增高,细胞增殖指数显著高于另外两组。结论::二次组织块成瘤(C组)可显著提高A549的成瘤率,是一种高效的裸大鼠移植瘤模型建立方法。第二部分吉西他滨联合顺铂介入化疗对肺癌A549裸大鼠移植瘤的实验研究目的:观察吉西他滨联合顺铂动脉化疗与静脉化疗对人肺腺癌A549裸大鼠移植瘤生长的抑制作用,探索最佳给药途径。方法::人源肺腺癌(A549)细胞系经传代培养后,用二次组织块成瘤法,与y|大鼠进行肿瘤移植,建立裸大鼠肺癌移植瘤模型。分为正常对照组、假手术对照组、静脉化疗组与动脉化疗组各10只,动态观察裸大鼠一般情况、肿瘤体积的变化、对荷瘤裸大鼠的抑瘤率、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平、HE染色及免疫组化Ki67的检测,比较吉西他滨联合顺铂两种给药途径对肺癌A549移植瘤的抑制效应。结果::动脉化疗组与静脉化疗组移植瘤生长均受到不同程度的抑制,动脉化疗组抑制尤为明显,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。4组肿瘤的体质量(g)为动脉化疗组(1.91±0.19)、静脉化疗组(2.61±0.21)低于荷瘤对照组(4.58±0.46)及假手术对照组(4.71±0.53),差异有统计学意义(P0.05),动脉化疗组、静脉化疗组的抑瘤率分别为57.6%、42.4%,两者差异有统计学意义(P0.05)。移植瘤HE染色提示动脉与静脉给药组均存在凋亡现象,但动脉化疗组凋亡较静脉化疗组明显。Bcl-2与Caspase3蛋白水平表达均显示,动脉与静脉给药皆可有效促进肿瘤凋亡,尤其以动脉给药效果更明显。免疫组化显示各组Ki-67均为阳性,其中动脉化疗组显示Ki-67增殖指数最低。结论:吉西他滨联合顺铂经动脉灌注更能有效控制人肺癌细胞移植瘤的生长,且动脉注射吉西他滨和顺铂较静脉注射有不同程度的优势,经动脉化疗途径在肺癌移植瘤治疗中具有更加明显的优势。第三部分吉西他滨及顺铂经动脉、静脉注射后血浆、组织药物浓度的变化目的:分析吉西他滨及顺铂通过动脉及静脉途径注射后血浆及组织内药物浓度的变化情况。方法::40只带瘤裸大鼠,随机分为动脉注射组、静脉注射组两大组,带瘤裸大鼠分别经动脉及静脉注射吉西他滨及顺铂。于注射后5、10、20、40、80、120、360、720 min采血液标本,注射后10、40、120、720 min各组分别处死5只裸大鼠,取瘤体组织标本,以高效液相色谱法测定血浆及肿瘤组织中吉西他滨浓度,ICP-MS法测定血浆及肿瘤组织中的铂含量,计算药代动力学参数。结果::经动脉及静脉注射两种药物后,血浆及肿瘤组织中的药物浓度出现规律性变化,其变化过程均可用两室模型来描述。动脉注射组药物的药代动力学参数与静脉注射组的药代动力学参数不同,动脉组注射药物后,血浆药物峰浓度[吉西他滨:(20.84±10.11)μg/m L,顺铂:(15.13±7.12)μg/m L]均低于静脉组[吉西他滨:(28.96±7.02)μg/m L,顺铂:(21.64±9.72)μg/m L],靶组织内药物峰浓度[吉西他滨:(20.18±9.43)μg/m L,顺铂:(6.98±0.31)μg/m L]均高于静脉组[吉西他滨:(18.19±10.30)μg/m L,顺铂:(3.04±0.11)μg/m L],靶组织内药物曲线下面积[吉西他滨:(2641±411)μg/(min m L),顺铂:(6025±870)μg/(min m L)]均明显高于静脉组[吉西他滨:(1663±568)μg/(min m L),顺铂:(1780±883)μg/(min m L)],差异均有统计学意义(P0.05或0.01)。结论:动脉注射组吉西他滨和顺铂较静脉注射组有不同程度的优势,这种优势与药物的药理特性有关。
【图文】：

1裸大鼠（复旦大学公共卫生中心实验动物所饲2复旦大学公共卫生中心实验动物所SPF级动物小鼠：BALB/C裸小鼠（图3），4-5周龄，体重为22.1SPF

饲养于复旦大学公共卫生中心实验动物所SPF级动物房（图2），饲以高压灭菌水和饲料，各组鼠均同等自由饮水、摄食，饲养室相对湿度(40%-50%)，，温度(22-25℃)，光照12h明暗交替。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 蒋建国;胡国华;;肿瘤微环境在肿瘤淋巴转移中的作用研究进展[J];重庆医学;2010年09期

2 高广辉;周鑫莉;黄若凡;蒋京伟;初钊辉;詹琼;梁晓华;;铂类联合吉西他滨或长春瑞滨治疗晚期非小细胞肺癌的Meta分析[J];中国肺癌杂志;2009年01期

3 吴一龙;非小细胞肺癌国际分期的修订和现代治疗策略[J];国外医学(肿瘤学分册);1998年06期

4 张建;;每周吉西他滨联合顺铂方案对晚期非小细胞肺癌疗效的Ⅱ期临床试验[J];广东医学;2013年23期

5 王春燕;郑辉;;紫杉醇脂质微球注射液对荷人肺癌H460裸鼠的抑瘤作用[J];癌变.畸变.突变;2014年01期

6 茹玉航;;非小细胞肺癌外科手术治疗研究进展[J];中外医疗;2011年27期

7 许卫国;杨建勇;李鹤平;陈伟;庄文权;;建立大鼠肝动脉插管途径的方法学研究[J];介入放射学杂志;2007年04期

8 史秀忠;于爱丽;金小桦;戴丽娜;张涛;王美霞;王宗玲;潘文;;吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌临床观察[J];交通医学;2009年02期

9 王树军;;局部晚期非小细胞肺癌外科综合性治疗进展[J];临床肺科杂志;2010年01期

10 施长杲;吕维富;;中晚期肺癌的介入治疗现状及进展[J];临床肺科杂志;2011年02期

本文编号：2569402