c-Src在EGF介导的乳腺癌细胞MDA-MB-231上皮间质化中的作用研究

发布时间：2020-03-25 20:40

【摘要】：目的:乳腺癌发生远处转移是患者死亡的主要原因之一,众多研究表明EGFR在癌组织中的表达水平与这些肿瘤的转移情况及进展程度存在明显的正相关。前期研究显示上皮间质化在肿瘤的发生、恶性转变及化疗抵抗上起着重要的作用,近年文献报道Src激酶家族成员c-Src在转移性乳腺癌组织样本中表达最为显著。因此本实验旨在探讨乳腺癌中EGFR的表达是否与其转移潜能相关,EGF激活EGFR导致乳腺癌细胞转移是否通过上皮间质化过程得以实现,c-Src是否与EGF介导的乳腺癌细胞上皮间质化和迁移能力相关。方法:(1)筛选出EGFR高表达的乳腺癌细胞株:通过RT-qPCR及Western blot检测正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)、LuminalA型乳腺癌细胞(MCF-7)、三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)三株细胞的EGFR及EGFL-7表达情况,高表达EGFR细胞株用于后续实验。(2)探究EGF对高表达EGFR细胞株上皮间质化和迁移能力的影响:分别给予EGF以及EGF抑制剂利多卡因进行处理,利用RT-qPCR及Western blot检测EGF诱导前后上皮间质化标志蛋白(ZO-1、MMP-9)的表达情况,划痕实验检测乳腺癌细胞迁移能力的改变。(3)明确c-Src在EGF诱导的乳腺癌细胞上皮间质化和迁移能力改变中的作用:将乳腺癌细胞分成对照组、c-Src抑制剂PP2组、PBS组、EGF组、EGF+PP2组及EGF+PBS组;利用Western blot检测上皮间质化标志物的表达情况,划痕实验检测乳腺癌细胞迁移能力的变化。结果:(1)MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231细胞均有EGFR的表达。在检测的细胞中高转移潜能的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞其EGFR的mRNA及EGFR的蛋白水平在检测的三株细胞中表达最高。(2)EGF作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h后细胞的形态发生变化,细胞极性消失,细胞呈梭型、纺锤样;细胞与细胞之间连接疏松,细胞间隙增大。而给予500μM利多卡因预处理后,细胞形态改变不明显,保持乳腺癌细胞上皮细胞的特征。RT-qPCR及Western blot实验结果显示单用EGF激活组与其它组相比上皮标记蛋白ZO-1表达下调,而间质标记蛋白MMP-9表达上调;划痕实验结果显示EGF诱导的细胞迁移能力显著高于对照组及利多卡因干预组。(3)在EGF诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231发生上皮间质化前加入c-Src激酶抑制剂PP2进行干预,乳腺癌细胞MDA-MB-231仍维持上皮细胞形态;Western blot结果显示加PP2干预后上皮细胞标志物ZO-1与未加PP2干预组比较表达上调,而间质细胞的标志物MMP-9加PP2组与未加PP2组比较表达下调;划痕实验结果PP2干预组较未加PP2组细胞迁移能力下降。结论:正常乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中均存在EGFR的表达,其在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达最高,表明EGFR的表达与乳腺癌细胞的侵袭迁移潜能呈正相关,EGFR可能为预测乳腺癌转移的标志物之一;EGF与EGFR结合可以诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231发生上皮间质化,促进乳腺癌细胞MDA-MB-231的浸润及转移;非受体酪氨酸激酶c-Src蛋白在EGF激活的MDA-MB-231乳腺癌细胞上皮间质化和迁移中具有重要作用,非受体酪氨酸激酶c-Src蛋白可能是乳腺癌的潜在治疗靶点。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

【参考文献】