ASPM在胰腺导管腺癌血管生成及侵袭转移中的作用及初步机制研究
发布时间：2020-03-26 01:37
【摘要】：研究背景:胰腺癌是常见的恶性肿瘤之一,预后较差,近年来,胰腺癌的发病率逐年上升。研究影响胰腺导管腺癌侵袭转移的分子机制,有助于了解肿瘤的发生发展,并为临床诊治和疾病预后提供理论依据。大量的文献报道,肿瘤的侵袭和转移与血管生成、细胞外基质的降解及肿瘤上皮间质转化过程相关,抗血管生成和抑制细胞基质降解及上皮间质转化均可能在抗肿瘤治疗中发挥一定作用。ASPM是一种异常纺锤体样头小畸形相关的基因,在胰腺导管癌细胞小管形成过程中表达降低,而在胰腺导管腺癌中高表达,通过Wnt通路促进胰腺导管腺癌的侵袭和维持胰腺导管腺癌细胞的干细胞特征。但ASPM在胰腺导管腺癌血管生成、细胞外基质降解、上皮间质转化过程中是否起作用,是否通过Wnt信号调节肿瘤血管生成、上皮间质转化、影响细胞外基质降解等机制仍不清楚。LRP16是白血病相关基因,亦是ERa信号通路上的应答基因,参与了人类肿瘤的发生发展,但是否参与了胰腺导管腺癌的发生、侵袭、转移尚不清楚,其与ASPM的相互关系还需进一步研究。目的:通过检测对胰腺导管腺癌标本中ASPM的表达,并结合检测胰腺导管腺癌血管内皮生长因子VEGF、微血管密度MVD、β-catenin、基质金属蛋白酶MMP7和LRP16的表达,评估ASPM在胰腺导管腺癌中的作用,并确定其作为预后判断危险因素的可能性;通过免疫组化、RNAscope、体外细胞实验,使用RNAi沉默技术,从蛋白、mRNA水平了解ASPM与胰腺导管腺癌肿瘤血管生成、上皮间质转化、细胞外基质降解和Wnt信号通路的关系。方法:1.选取解放军总医院病理科经病理证实的118例胰腺导管腺癌和34例癌旁正常胰腺组织蜡块,采用免疫组织化学分析ASPM、LRP16、β-catenin、VEGF、MMP7在胰腺导管腺癌及正常胰腺组织中的表达情况;用CD34标记观察肿瘤血管,分析ASPM、LRP16与胰腺导管腺癌临床病理参数的关系;探讨ASPM与LRP16、β-catenin、VEGF、MMP7和MVD之间的相关性。选取16例淋巴结和9例肝转移癌的原发灶和转移灶组织,通过免疫组化及RNAscope方法检测ASPM的蛋白及mRNA的表达情况。2.在胰腺癌细胞株PANC-1、AsPC-1中采用瞬时转染技术将ASPM基因沉默,CCK8、Transwell实验检测胰腺癌细胞株中ASPMmRNA水平降低情况下,胰腺癌细胞的生长情况、细胞增殖及侵袭能力的改变。3.qRT-PCR、Western blot实验研究调控 ASPM,检测 DVL、β-catenin、VEGF、α-SMA、MMP7 表达,分析 ASPM 的功能及与 DVL、β-catenin、VEGF、MMP7、α-SMA 因子间的关系。结果:1.ASPM在胰腺导管腺癌的表达与胰腺导管腺癌侵袭、转移、TNM分期及预后明显正相关(P0.05)。免疫组织化学及RNAscope方法检测原发灶和转移灶ASPM 的蛋白及 mRNA 表达差异显著(P0.05)。ASPM 与β-catenin、VEGF、MVD、LRP16、MMP7 呈显著正相关(P0.05)。2.ASPM 低表达可降低 PANC-1、AsPC-1胰腺癌肿瘤细胞的生长、增殖及侵袭能力(P0.05)。3.沉默PANC-1、AsPC-1肿瘤细胞的ASPM,β-catenin、DVL、MMP7、VEGF、α-SMA转录水平在沉默组与阴性对照组差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot检测显示β-catenin、DVL、α-SMA、VEGF、MMP7蛋白表达与阴性对照组差异有显著性(P0.05)。结论:1.ASPM、LRP16与胰腺导管腺癌的预后相关,ASPM可以作为判断胰腺导管腺癌侵袭、转移、血管生成和预后的指标。2.ASPM与胰腺导管腺癌增殖、侵袭密切相关。沉默ASPM可以有效地抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭等恶性生物学行为。3.沉默ASPM可抑制Wnt信号通路关键因子的转录和蛋白表达,可抑制肿瘤血管生成,上皮间质转化及细胞外基质的降解,ASPM可能通过Wnt-DVL-β-catenin调节MMP7、VEGF、α-SMAmRNA转录和蛋白表达。4.ASPM可通过多个途径影响胰腺导管腺癌的侵袭和转移。ASPM与LRP16协同影响胰腺导管腺癌的发生发展。靶向调控ASPM和LRP16,可能对胰腺导管腺癌侵袭转移起到调控作用,可作为潜在的治疗手段。
【图文】：
原发灶和转移灶的蜡块，进行ＴＭＡ构建，通过免疫组化及ＲＮＡｓｃｏｐｅ方法检测原发灶逡逑和转移灶中ＡＳＰＭ的表达，并分析比较其中的差异。我们发现ＡＳＰＭ蛋白及ＲＮＡｓｃｏｐｅ逡逑评分在转移灶高于原发灶，，差异具有显著性（Ｐ＝０．０１８；Ｐ＝０．０２３）（图２、３，表３、４）。逡逑表３．免疫组化检测ＡＳＰＭ在原发胰腺导管腺癌和淋巴结、肝转移性胰腺导管腺癌组织中的表达逡逑ＡＳＰＭ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ＡＳＰＭ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ逦ｙ２逦Ｐ邋ｖａｌｕｅ逡逑Ｐｒｉｍａｒｙ逦１２逦１３逡逑５．５６逦Ｐ＝０．０１８逡逑Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ逦２０逦５逡逑ｒ逦Ｊ邋？逦？邋＇逦？邋－邋ＶＴ邋Ｔ逦？逦ｆ邋．逡逑、＇＇邋．邋－■邋？邋？邋＇邋．邋．邋＊逡逑ｉ逦－逦＇邋－邋？邋－１邋．逡逑４＊ｃ邋■＇逦＾邋ｒ邋．‘逦？逦，？逦＼、ｖ逡逑＾逦＊逦y义希铃澹汗沐澹у危缅义希铮海义希簾湥义稀
本文编号：2600748
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