RAP1A在结直肠癌中的临床意义和促癌分子机制研究

发布时间：2020-04-07 15:35

【摘要】：目的探讨基因RAP1A(Ras-related protein1,RAP1A)在结直肠癌中的表达及临床意义并探讨其在结直肠癌进展中的机制。材料和方法1.选取结直肠癌患者的组织标本,检测RAP1A的表达并分析其临床意义。2.检测不同结直肠癌细胞株中RAP1A的表达并通过慢病毒转染构建沉默RAP1A的稳转株,通过MTT、克隆形成、流式细胞术、Transwell侵袭与转移实验检测敲减RAP1A后肿瘤细胞的生物学功能变化情况。动物实验体内进行探究RAP1A的生物学作用。3.通过转录组基因芯片进行分析,探究结直肠癌细胞中RAP1A所调控的下游分子及涉及的信号通路并对下游通路蛋白进行验证,检测肿瘤细胞中EMT标记物的表达情况。4.对下游调节基因进行过表达实验,通过MTT实验,克隆形成试验,流式细胞术检验靶基因的细胞生物学功能变化。5.在II期结直肠癌标本中检测中RAP1A下游分子波形蛋白的表达水平并分析临床意义。结果1.结直肠癌组织中RAP1A表达与肿瘤浸润显著相关(P0.05),其表达水平是影响结直肠癌患者的独立的预后因素。2.下调RAP1A的表达后,细胞增殖、抗凋亡、侵袭能力、迁移能力、克隆形成能力均被抑制(P0.05)。动物实验也表明下调RAP1A可以使HT29和SW620细胞株在裸鼠皮下成瘤能力明显下降(P0.05)。3.基因芯片分析表明PTEN信号通路参与了RAP1A的调控,进一步实验发现FOXO3显著上调(P0.05),进而确定FOXO3可能为RAP1A调控下游的靶点。敲减RAP1A后E-cadherin的表达上调,波形蛋白和N-cadherin下调。4.过表达FOXO3后会表现出和沉默RAP1A后相似的生物学变化,HT29和SW620的增殖,抗凋亡,克隆形成均被抑制(P0.05)。5.波形蛋白的表达与肿瘤浸润程度显著相关(p0.05),波形蛋白的表达水平是影响II期高危结直肠癌患者的独立预后因素(p0.05)。结论RAP1A可通过PTEN/FOXO3/CCND1信号通路以及调控EMT促进结直肠癌的发生发展。大样本的临床回顾分析表明RAP1A可作为结直肠患者总体生存的独立预后因素,通过靶向RAP1A基因抑制肿瘤的生长有望成为治疗结直肠癌的新策略。
【图文】：

图 1 RAP1A 在结直肠癌及癌旁正常组织中 mRNA 和蛋白含量的表达。Fig.1 The mRNA and protein expression of RAP1A in CRC and matched adjacent normaltissues.2. 免疫组化检测结直肠癌组织和癌旁正常组织的 RAP1A 表达情况在收集 144 例组织标本进行免疫组化的检测，发现 RAP1A 在结直肠癌组织中的高表达率要显著高于在癌旁正常组织的高表达率，差异具有统计学意义（73/144 vs26/144, p<0.05）。其中代表性的免疫组化结果如图 2 所示。

上海交通大学硕士学位论文4. RAP1A 表达情况与结直肠癌患者预后之间的关系根据 Kaplan-Meier 模型构建的生存曲线可以看出，无论是全部患者（图 3a）或者是 II 期病人（图 3b），，还是 III 期病人（图 3c）,RAP1A 高表达的患者比 RAP1A低表达的患者具有更低的总体生存率和无病生存率（P<0.05）。而通过基于 COX回归模型中单因素结果表明术前 CEA、RAP1A 的表达、淋巴结转移与否是影响结直肠癌患者总体生存独立的预后因素，多因素分析显示 RAP1A 的表达、淋巴结转移与否是影响结直肠癌患者总体生的预后因素（表 2），在对纳入的全部患者进行无病生存率的单因素和多因素分析显示 RAP1A 可作为影响无病生存的独立的预后因素（表 3）。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.34

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本文编号：2618078