乙二醛酶Ⅰ促进食管鳞癌恶性进展的机制研究

发布时间：2020-04-17 09:26

【摘要】：第一部分:乙二醛酶Ⅰ在食管鳞癌中的表达及其与临床病理参数相关性目的食管癌是死亡率居世界第6的恶性肿瘤,也是最为常见的侵袭性肿瘤之一。我们前期研究表明长链非编码RNA MALAT1可以促进食管鳞癌的恶性进展,通过基因芯片分析干扰ECA109细胞的MALAT1表达后筛选出乙二醛酶Ⅰ GLO1可能是其下游靶基因。而GLO1已经证实与多种肿瘤的发生发展密切相关,但GLO1在食管癌中的作用尚不明确,本研究旨在探讨GLO1在食管鳞癌中的表达情况,并分析其表达水平与临床病理参数的相关性。方法我们选取南京军区总医院心胸外科40例食管鳞癌肿瘤组织以及癌旁正常组织,使用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫组化方法检测GLO1的表达情况并分析其表达与临床病理参数的相关性。结果我们检测到GLO1 mRNA在40对肿瘤组织中平均表达水平是正常组织2倍(p=0.0040),GLO1在29例肿瘤组织中GLO1的mRNA表达水平(p0.01)和蛋白表达水平均高于正常组织,且GLO1的高表达主要发生在淋巴结转移(p=0.013)的晚期(p=0.024)食管癌患者。结论GLO1在食管鳞癌中高表达,且GLO1高表达主要发生在淋巴结发生转移的晚期食管癌患者。第二部分:GLO1促进食管鳞癌恶性表型的机制研究目的GLO1可能是一个潜在的与食管鳞癌的恶性表型密切相关的促癌基因。本研究旨在探讨GLO1在食管鳞癌的表达水平与食管鳞癌恶性进展的关系,研究GLO1可能参与的调控食管鳞癌恶性表型的机制,为食管癌的临床治疗提供新的思路。方法1.设计合适的siRNA干扰GLO1的表达,体外功能实验观察GLO1对肿瘤增殖、迁移能力及细胞周期、凋亡的影响。2.体内裸鼠移植瘤模型实验观察GLO1的干扰对ESCC肿瘤在裸鼠体内的生长的影响。3.使用qRT-PCR方法检测29对高表达GLO1的食管肿瘤组织中MALAT1表达水平分析二者相关性,sirna干扰ESCC细胞系MALAT1表达后,qRT-PCR和western blot法测定GLO1表达水平变化情况。结果1沉默GLO1后的ECA109和TE13相较于正常表达GLO1的ESCC细胞对照组,肿瘤细胞的迁移、侵袭、增殖能力明显降低,ESCC细胞的凋亡比例明显增加,而ESCC细胞周期阻滞在G0/G1期。2裸鼠成瘤实验提示,沉默GLO1后肿瘤的生长速度和体积均小于对照组。同时,对肿瘤组织进行免疫组化染色,GLO1沉默组的KI67表达均低于对照组(P0.05)。3高表达GLO1组肿瘤组织mRNA与食管癌MALAT1表达水平显著相关,R=0.7217 P0.01,沉默MALAT1后GLO1的表达水平也明显下降.结论我们的实验表明GLO1在食管鳞癌中高表达,GLO1可促进ESCC细胞的增殖,迁移侵袭等能力,同时也证明GLO1是长链非编码RNA MALAT1 一个潜在的下游调控基因,可能与MALAT1共同参与促进食管癌的进展,可以作为今后治疗食管鳞癌的一个潜在靶点。
【图文】：

代谢过程,富集,通路分析,差异表达基因

前十的差异基因见表１－１，对表达下调差异基因ＧＯ分析结果显涉及小分子代谢逡逑过程富集最为明显图１－１－Ａ，，对差异表达的基因进行ＫＥＧＧ通路分析，沉默组逡逑ＥＣＡ１０９细胞系与正常组在肿瘤代谢通路上差异最大，见图１－卜Ｂ，我们推测ＧＬ０１逡逑可能在肿瘤代谢通路途径与ＭＡＬＡＴ１联系，从而促进食管癌进展。逡逑表１－１邋ＥＣＡ１０９差异表达基因下调前十位逡逑Ｔａｂｌｅ邋１：邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ邋ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ邋ｇｅｎｅｓ邋ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ邋ｂｙ邋Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ邋ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ邋ｉｎ邋ＥＣＡ１０９逡逑＾Ｇｅｎｅ邋Ｓｙｍｂｏｌ邋ＥＣ１０９－ＮＣＪＨＴＡ－２＿０邋ＥＣ１０９－ＳＩ１邋ＪＨＴＡ－２＾０）．邋Ｆｏｌｄ邋ｃｈａｎｇｅ逡逑）．ｒｍａ－ｇｅｎｅ－ｆｕｉｌ－Ｓｉｇａｌ邋ｒｍａ－ｇｅｎｅ－ｆｕｌｌ－Ｓｉｇｎａｌ邋（ＳＩ１／ＮＣ）逡逑ＧＬ０１逦９．３２６８３９逦７．７５８５５４逦０．３３７２０９０１２逡逑ＣＴＨ逦７．１１６７２６逦５．９６３５７８逦０．４４９６４３０２７逡逑ＳＰＩＮＫ１３逦９．５６０６３４逦８．４８４０８８逦０．４７４１６２６７３逡逑ＣＥＡＣＡＭ７逦５．０７２６３８逦４．０９１５３１逦０．５０６５９０８７６逡逑ＴＡＦ１３逦６．４０８６９８逦５．４３６９９４逦０．５０９９０３４４８逡逑ＨＧＤ逦５．５６３０１４逦４．６１６４１５逦０．５１８８５４１６５逡逑ＵＳＨ１Ｃ逦７．１４２２２逦６．２４７８３５逦０．５３７９７６４７８逡逑ＳＬＣ１６Ａ６逦９．９５８

转染,细胞

图２－ｌ邋Ａ邋ｃｊＲＴ－ＰＣＲ法和ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ结果均显示对ＥＣＡ１０９细胞进行转染后ｓｉ－ＧＬＯｌ组相逡逑对ｐｓｉ－ｃｏｎｔｒｏ丨和个：丨＇丨对照ＮＣ饥（；丨川的灰达水Ｔ？受到明eA抑制。ＢｑＫＩ’逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.1

【参考文献】