MAP4在肺腺癌中的表达特征及其促进迁移侵袭的机制研究

发布时间：2020-04-19 16:08

【摘要】：背景与目的:截止目前,在全球范围内肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率位于肿瘤死因首位。肺腺癌是肺癌最常见的类型。尽管随着多种治疗技术的发展,但是其总生存率仍较低。积极寻找与肺腺癌相关的分子标志物及治疗靶点至关重要。微管是细胞骨架的重要组成成分之一。微管相关蛋白4(MAP4)在微管装配和稳定方面起到重要的作用。最近研究发现MAP4是一种促进膀胱癌及食管鳞癌侵袭转移的肿瘤相关基因。然而,目前还没有研究阐明MAP4在肺腺癌中的功能及分子机制。本研究的目的旨在探讨MAP4在肺腺癌患者组织中的表达,并且评估其对肺腺癌患者预后及在肿瘤进展方面的影响。材料与方法:免疫组化法测定91例肺腺癌组织及86例对应癌旁组织中的MAP4表达水平,并分析其与临床病理因素的相关性。利用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-rank检验比较MAP4高表达组及低表达组之间总生存率的差异。同时比较不同临床病理参数对总生存率的影响。风险比例模型(Cox回归)分析影响肺腺癌患者预后的不良因素。体外实验进一步分析MAP4表达对促进肺腺癌恶性生物学行为的影响。选取肺腺癌细胞株A549及H1299,瞬时转染MAP4-siRNA,RT-PCR法判断干扰效率,Western Blot验证转染细胞MAP4蛋白的表达情况。通过划痕实验及Transwell小室侵袭实验评估MAP4干扰对肺腺癌细胞株迁移及侵袭的影响。CCK-8增殖实验观察对细胞增殖能力的影响。流式细胞仪检测干扰组及阴性对照组的凋亡及细胞周期分布情况。结果:91例肺腺癌组织标本中有51例MAP4蛋白高表达(56.04%),在对应的86例癌旁组织中有20例高表达(23.26%),经统计学分析,在肺腺癌组织中MAP4阳性表达率显著高于癌旁组织(P0.0001)。MAP4蛋白在肺腺癌中的表达与分化程度、病理T分期及TNM分期相关(P=0.03,P0.01,P0.01),但与性别、年龄及病理N分期无关(P=0.75,P=0.10,P=0.06)。对Kaplan-Meier生存曲线进行log-rank检验发现,病理N分期(pN1-3)、Ⅱ-Ⅲ期患者及MAP4蛋白高表达组,总生存率分别低于pN0、Ⅰ期及MAP4蛋白低表达组,具有显著的统计学差异(P0.001,P0.001,P=0.028)。但是在性别、年龄、分化程度及病理T分期方面,组间无显著的统计学差异(P=0.207,P=0.818,P=0.927,P=0.272)。Cox回归分析显示单因素分析中病理N分期、TNM分期及MAP4为不良预后因素(P0.001,P0.001,P=0.028)。多因素分析得出病理N分期及MAP4为影响肺腺癌患者总生存率的独立不良预后因素(P0.001,P=0.042)。Western Blot结果显示在A549及H1299两细胞株中干扰组的MAP4蛋白表达水平显著低于阴性对照组(P值均小于0.001)。通过划痕实验及Transwell侵袭实验,A549和H1299细胞在转染MAP4-siRNA后,siMAP4组在各时间点均显著抑制了肺腺癌细胞的迁移能力,两组之间具有显著的统计学意义(P0.001;P0.001)。和迁移结果一样,siMAP4组显著抑制了肺腺癌细胞株的侵袭能力,两组之间具有显著的统计学意义(P0.001;P0.001)。CCK8增殖实验显示,MAP4干扰组与阴性对照组相比,在细胞增殖方面第1-5天均无显著的统计学差异。流式细胞仪结果提示MAP4表达干扰对肺腺癌细胞凋亡及细胞周期分布无明显影响,无显著的统计学差异。结论:我们的研究显示MAP4通过影响肺腺癌细胞的迁移和侵袭,进而促进肺腺癌的进展。同时MAP4在肺腺癌中是一种独立的预后标志物,并可能成为潜在的肺腺癌治疗靶点。
【图文】：

凋亡,肺腺癌细胞

8. Annexin V - FITC/PI double staining was used to detect the effect orence on the apoptosis of lung adenocarcinoma cell line. Compared e control group, the MAP4 interference group inhibited the apoptosiarcinoma cells, but there was no significant difference.nnexin V - FITC/PI 双染法检测 MAP4 干扰对肺腺癌细胞株凋亡的胞仪分析，，与阴性对照组相比，MAP4 干扰组抑制肺腺癌细胞的凋的统计学差异。45

细胞周期分布,转染,细胞转染,肺腺癌

Figure 9. The cell cycle was analyzed by flow cytometry in A549 cells transfectedwith MAP4 siRNA or a negative control. The results showed that MAP4 gene silencehad no effect on the cell cycle at all time points compared with the control group.图 9 肺腺癌 A549 细胞转染 MAP4-siRNA 与阴性对照组的细胞周期分布。经统计分析，在 24h、48h 及 72h 时间点，两组间均无显著的统计学差异。47
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

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