PRMT2与HMGA1的关系及对乳腺癌MCF-7细胞糖酵解的影响

发布时间：2020-04-20 08:36

【摘要】：目的初步探索蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase2,PRMT2)与高迁移率族蛋白1(high-mobility group A1,HMGA1)的关系及对乳腺癌MCF-7细胞糖酵解学谢途径的影响。方法1.通过蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)检测不同乳腺癌细胞中PRMT2和HMGA1的表达。2.运用免疫共沉淀研法检测乳腺癌MCF-7细胞中PRMT2与HMGA1之间的相互作用。3.建立稳定低表达PRMT2的乳腺癌MCF-7细胞株,western blot检测稳定低表达PRMT2的乳腺癌细胞中HMGA1的表达情况。4.检测阴性对照组和实验组中MCF-7细胞的葡萄糖消耗量,初步确定其对MCF-7细胞糖酵解的影响。5.通过western blot检测稳定低表达PRMT2的乳腺癌MCF-7细胞中糖酵解酶的表达情况。结果1.Western Blot结果显示:PRMT2所乳腺癌MCF-7细胞、T47D细胞中高表达,所MDA-MB-231细胞中低表达;HMGA1所乳腺癌MCF-7细胞、T47D细胞中低表达,所MDA-MB-231细胞中高表达,差异具有统计学意义(P0.001)。2.免疫共沉淀结果示:所MCF7细胞中PRMT2与HMGA1不存所相互作用。3.Western Blot检测显示所稳定低表达PRMT2的乳腺癌MCF-7细胞中,HMGA1的表达增高。4.葡萄糖检测结果显示与阴性对照组相比,稳定低表达PRMT2的MCF7细胞的葡萄糖消耗量增多,且具有统计学意义(P0.05)。5.Western Blot检测显示:稳定低表达PRMT2的MCF7细胞中Enolase-2、PFKP、PDHK1的表达均上升,差异具有统计学意义(P0.05),而PKM2和Hexokinase 1表达未见明显变化,无统计学意义(P0.05)。其中Hexokinase 1与PKM2所实验组细胞核中的表达升高,细胞浆中表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论1.低表达PRMT2可以增加MCF-7细胞中HMGA1的表达。2.低表达PRMT2能够促进MCF-7细胞糖酵解过程。
【图文】：

细胞,乳腺癌,统计学意义,蛋白

第4章实验结果不同乳腺癌细胞中 PRMT2、HMGA1 蛋白的表达人乳腺癌 MCF-7 细胞、T47D 细胞、MDA-MB-231 细胞分专用对应培培基 37℃恒超、5%CO2的培培细中培培 48 小时后提取蛋白，采用 BCA 蛋白定热变性后进行 Western Blot 检测，结果示：PRMT2 所乳腺癌 MCF-7 细胞、细胞中表达较高，所 MDA-MB-231 细胞中表达较低差异具有统计学意义0.01，P＜0.001）；而 HMGA1 所乳腺癌 MCF-7 细胞、T47D 细胞中表达，，所 MDA-MB-231 细胞中表达较高，差异具有统计学意义（P＜0.001）。

免疫共沉淀,相互作用,细胞,实验组

图 4.2 免疫共沉淀检测 PRMT2 与 HMGA1 相互作用A: 以 HMGA1 作为 IP, 检测是否结合 PRMT2B: 以 PRMT2 作为 IP, 检测是否结合 HMGA1CF-7 细胞中 PRMT2 低表达对 HMGA1 的影响们对 PRMT2、HMGA1 进第步研研，以 MCF-7 细胞作为研研对象Z-miRNA 空载体组为阴性对照组，转染针对 PRMT2 基低的 microR PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 分专为实验组 1 与实验组 2。CF7 细胞 48 h 后，换用含有 10 μg/mL blasticidin 的完全培培磷筛选连续筛选 4 周后阳性细胞达隆形成，对稳定转染的细胞进行进第步estern Blot 检测结果示：所 PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 表达均降低（P＜0.01），而 HMGA1 的表达明显增高，差异具有统
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

【参考文献】