hsa-mir-196b在胰腺癌中表达及其对胰腺癌生物学行为的影响

发布时间：2020-05-03 14:09

【摘要】：目的:建立胰腺癌miRNA差异表达谱,探讨miR-196b在胰腺癌恶性进展中的作用机制。方法:1.随机选取三对胰腺导管上皮细胞癌及癌旁组织,通过Illumina二代高通量测序平台Hise-2500对胰腺癌组和癌旁组织样本的mi RNA进行深度测序分析,筛选出miRNA差异表达谱;2.应用相关软件和网站对显著差异表达的miRNA进行生物信息学分析,分析出有研究价值的目标miRNA,并进一步分析目标miRNA(hsa-mir-196b)与胰腺导管内上皮细胞癌病理分级及临床分期的关系;RT-PCR扩大样本量(15对)验证hsa-mir-196b在癌及癌旁组织间的差异表达。3.探索hsa-mir-196b对胰腺癌细胞生物学行为的调控作用,应用双荧光素酶报告基因法和Western Blot验证HOX B6是其下游靶基因,并探讨HOX B6在胰腺导管上皮细胞癌和癌旁组织中的表达与胰腺癌的临床病理特征和预后的相关性。结果:1.胰腺癌和癌旁组织miRNA表达存在差异;高通量测序分析发现,3对胰腺癌和癌旁组织共存在579种已知的独立的已知miRNA,发现差异显著的miRNA中筛选出表达差异表达的miRNA共计133个。最终,筛选出在各组中表达稳定并且表达差异高的已知miRNA表达上调mi RNA(2个):hsa-mir-31;hsa-mir-196b;表达下调miRNA(6个):hsa-mir-148a;hsa-mir-141;hsa-mir-217;hsa-mir-216b;hsa-mir-802;hsa-mir-216a。2.hsa-mir-196b与肿瘤患者的生存相关性最佳,且与肿瘤的组织学分级、病理分期、M分期、T分期均相关(p0.05);采用RT-PCR对15对胰腺癌和癌旁组织hsa-mir-196b表达进行验证。与癌旁组织比较,has-miR-196b在胰腺癌组中的表达显著上调,与测序结果一致,差异有统计学意义(p0.05)。3.hsa-miR-196b具有促进胰腺导管上皮癌细胞增殖、侵袭和迁移能力;HOX B6基因是hsa-mir-196b直接作用的下游靶基因,hsa-mir-196b可与HOX B6的3’-UTR区域结合,在转录后水平发挥对HOX B6基因的直接抑制作用;HOX B6在胰腺导管上皮细胞癌的表达明显低于癌旁正常胰腺导管组织;HOX B6与胰腺的生存期明显相关,表达越高的患者预后越好。结论:1.本研究二代测序初步建立人胰腺癌及癌旁组织特异性差异miRNA表达谱,并为进一步研究miRNA在胰腺癌中的作用提供了基础;分析验证了hsa-mir-196b在胰腺癌组织中表达高于癌旁组织,且可能起到癌基因样作用;2.首次证明了HOX B6在胰腺癌中起抑癌基因样作用;3.首次证明胰腺癌中hsa-mir-196b是通过靶向调节下游HOX B6的表达并可能激活了ERK信号通路和P38信号通路促进胰腺癌细胞的增殖、迁徙和侵袭发挥癌基因样作用。
【图文】：

线图,实验路,线图

miRNA-seq实验路线图

琼脂凝胶电泳,完整性检测,样本

南京医结果RNA 的浓度及完整性检测结果。样本 RNA 的浓度经分光光度计检测：样本 RNA 的 O-2.1 之间，且浓度介于 300~400ng/μl 之间；样本 RNA 的完整性检测：电泳时，可见 RNA 出现 rRNA)，有时会有第三条条带 (5S rRNA)，最上方未体 RNA 条带未出现弥散，提示 RNA 的无降解（图倍，比值在 1.7-2.0 之间，，说明各个样本的 RNA 质量，详见表 1.1。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.9

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