高表达DLL1诱导了肿瘤血管正常化和抑制了肿瘤生长

发布时间：2020-05-09 21:03

【摘要】：【研究目的】Notch信号通路是一个非常保守的信号通路,在多种生命过程种发挥着重要的作用。在哺乳动物细胞中,Notch信号通路由四种受体(Notch1-4)和5种配体(DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2)组成。近年来的研究发现DLL4参与调控肿瘤血管生成,阻断DLL4信号通路虽然可以抑制肿瘤生长,但有可能导致血管瘤。所以,我们拟研究Delta配体家族的另一个成员DLL1对肿瘤血管的调节作用及其机制。【研究方法】我们用逆转录病毒转染的方法构建过表达DLL1的乳腺癌细胞系(EO771)、肺癌细胞系(LAP0297)和转入空载质粒载体的对照细胞系。在C57BL/6小鼠构建原位乳腺癌模型和FVB小鼠构建肺癌模型,记录肿瘤生长曲线。在肿瘤长到一定大小时,取出肿瘤组织,应用免疫组化分析肿瘤血管的形态与功能,利用流式分析仪检测肿瘤浸润免疫细胞的组成、表型和活性,通过q PCR检测相关基因表达情况。此外,通过体内去除特定T淋巴细胞来研究DLL1影响肿瘤血管形成的机制。【研究结果】我们利用慢病毒转染的方法成功构建了过表达DLL1的乳腺癌细胞系(EO771)、肺癌细胞系(LAP0297)和转入空载质粒载体的对照细胞系。动物实验结果显示,与空载对照相比,在肿瘤细胞中过表达DLL1能够抑制肿瘤生长,甚至导致部分肿瘤变小消失。高表达DLL1能够增加CD8~+T淋巴细胞的肿瘤浸润并提高其分泌IFNγ的功能。此外,高表达DLL1还能够促进巨噬细胞向M1型极化。而且,高表达DLL1降低了血管的密度,增加了周细胞的覆盖率和提高了血管的功能,说明高表达DLL1可以诱导肿瘤血管正常化。体内单独去除CD8~+T淋巴细胞能逆转DLL1对肿瘤生长的抑制作用和对肿瘤血管功能的促进作用,但不影响肿瘤血管的密度。同时去除CD8~+T和CD4~+T淋巴细胞可以逆转DLL1对肿瘤生长的抑制作用及其对肿瘤血管密度与功能的影响。【结论与意义】在肿瘤微环境中增加DLL1的表达可以促进CD8~+T细胞的肿瘤浸润与分泌IFNγ,诱导肿瘤血管正常化和抑制肿瘤生长。CD8~+T细胞介导了高表达DLL1对肿瘤生长的抑制作用,而DLL1对肿瘤血管的调控作用是通过CD8~+T和CD4~+T细胞来共同实现的。这些研究结果提示DLL1有望成为肿瘤免疫治疗的一个新靶点。
【图文】：

DLL1基因的PCR产物及质粒酶切鉴定琼脂糖凝胶电泳图

qRT-PCR及westernblot检测EO771肿瘤细胞DLL1的表达
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R730.2

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本文编号：2656731