miR-125b调控ART4蛋白对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

发布时间：2020-05-11 12:42

【摘要】：目的:探讨miR-125b对ART4蛋白的调控作用及在肝癌细胞中对其增殖和侵袭能力的影响。方法:q PCR检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-125b的表达情况;过表达miR-125b后q PCR检测ART4的表达;双荧光素酶实验检测miR-125b和ART4的关系;MTT实验检测过表达miR-125b对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-125b的过表达对肝癌细胞侵袭能力的影响;MTT实验检测过表达ART4后逆转miR-125b对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测过表达ART4后逆转miR-125b对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果:miR-125b在肝癌细胞中表达水平较低,过表达miR-125b可以有效抑制ART4蛋白的表达;过表达miR-125b可以抑制肝癌细胞的增殖侵袭能力;过表达ART4后可以逆转肝癌细胞被miR-125b抑制的增殖侵袭能力。结论:miR-125b在肝癌中表达下调,同时miR-125b可以调控ART4的表达影响肝癌细胞增殖和侵袭能力。
【图文】：

A)。在不同肝癌细胞株中，在所有4种肝癌细胞株(SMMC-7721、HepG2、MHCC-97L和HCC-LM3)中观察到miＲ-125b的表达均较低，未超过50%相对表达量，其中(图1B)SMMC-7721和其他细胞株相比，miＲ-125b表达最低，而且SMMC-7721的侵袭性相对较强。因此，我们选择了SMMC-7721细胞株进行后续研究。2.2双荧光素酶验证miＲ-125b与AＲT4的关联我们通过生物信息学分析发现，下游几种致瘤性相关基因可作为miＲ-125b的潜在靶标，包括MMP11、EＲBB2、EＲBB3、EDN1、VEGF-A、AＲT4和BCL-9L等等。而且miＲ-125b和下游AＲT4基因有相似可图1miＲ-125b的表达在肝癌癌组织和细胞株中的表达Fig．1ExpressionofmiＲ-125binlivercancertissuesandcelllinesNote:*.P＜0.05.结合的位点，为了验证二者之间是否有调节关系，我们进行双荧光素酶标记实验。首先我们构建了携带3'-UTＲ的荧光素酶报告因子，其中每个基因的结合位点与miＲ-125b结合位点相对应。荧光素酶测定显示miＲ-125b下游结合3'-UTＲ结合位点与AＲT4相符合，而不是其他靶点基因，，过表达miＲ-125b可以导致荧光素酶活性的显著降低(图2B)。过表达miＲ-125b后可明显抑制SMMC-7721细胞中AＲT4的表达(图2A)。表明miＲ-125b可以调控下游AＲT4的基因表达情况，可能是通过调控AＲT4的表达影响肝癌细胞株的生物学行为。2.3过表达MiＲ-125b抑制肝癌细胞株的增殖能力为了研究miＲ-125b对肝细胞癌增殖能力的影响，使用SMMC-7721细胞株进行质粒转染以增加miＲ-125b的表达。如图3所示，与对照组相比，qPCＲ分析证实，转染miＲ-125-mimic后，SMMC-7721细胞株中miＲ-125b表达水平明显上调。然后进行MTT实验检测miＲ-125b对SMMC-7721细胞增殖情况的影图2miＲ-125b与AＲT4之间的相互关系Fig．2Ｒelationship

显著降低(图2B)。过表达miＲ-125b后可明显抑制SMMC-7721细胞中AＲT4的表达(图2A)。表明miＲ-125b可以调控下游AＲT4的基因表达情况，可能是通过调控AＲT4的表达影响肝癌细胞株的生物学行为。2.3过表达MiＲ-125b抑制肝癌细胞株的增殖能力为了研究miＲ-125b对肝细胞癌增殖能力的影响，使用SMMC-7721细胞株进行质粒转染以增加miＲ-125b的表达。如图3所示，与对照组相比，qPCＲ分析证实，转染miＲ-125-mimic后，SMMC-7721细胞株中miＲ-125b表达水平明显上调。然后进行MTT实验检测miＲ-125b对SMMC-7721细胞增殖情况的影图2miＲ-125b与AＲT4之间的相互关系Fig．2ＲelationshipbetweenmiＲ-125bandAＲT4Note:A.EffectofmiＲ-125bonexpressionofAＲT4;B.DoubleluciferasetoverifytherelationshipbetweenmiＲ-125bandAＲT4，*.P＜0.05.图3miＲ-125b对肝癌细胞增殖能力的影响Fig．3EffectofmiＲ-125bonproliferationoflivercancercells李建华等miＲ-125b调控AＲT4蛋白对肝癌细胞增殖和侵袭的影响第12期·1767·

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 朱建平,蔡国友,沈子威;化学治疗药物对肝癌细胞增殖抑制作用的观察[J];中华普通外科杂志;2001年01期

2 蒋小玲,邓欣,聂广,杨大国;剔毒护肝方及其拆方对人肝癌细胞增殖及端粒酶活性的影响[J];中西医结合肝病杂志;2004年02期

3 孙宏伟;沈锋;吴孟超;;瞬时受体势C可能存在介导肝癌细胞增殖的作用[J];肿瘤;2006年04期

4 田文礼;赵亚周;彭文君;;蜂胶对肝癌细胞增殖及其脂肪沉积的影响[J];食品科学;2012年09期

5 杨春;陈文;钟晓琳;王忠琼;陈枫;夏纪毅;;丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞增殖的影响[J];山东医药;2012年32期

6 王静;宗瑞强;莫艳波;田国华;郝礼森;张国志;;无花果浆液对肝癌细胞增殖抑制作用研究[J];中国煤炭工业医学杂志;2014年04期

7 康九红,魏亚明,郑荣梁;二乙基二硫代氨基甲酸钠对人肝癌细胞增殖、再分化与凋亡的作用(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;2001年09期

8 胡辉,荆绪斌,蔡先彬;过氧化氢在乙醇抑制肝癌细胞增殖中的作用[J];临床消化病杂志;2005年03期

9 史冬梅;马天乐;涂水平;谭继宏;乔敏敏;章永平;江石湖;;X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1抑制肝癌细胞增殖和诱导凋亡的实验研究[J];中华消化杂志;2006年10期

10 赵新;;儿茶素抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡作用研究[J];中国现代医学杂志;2012年10期

相关会议论文 前10条

1 徐艳敏;钱程;;低浓度阿霉素促进肝癌细胞增殖[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年

2 田晶;周士胜;陶凌;董玲;杨安钢;;尼氟灭酸对肝癌细胞增殖的影响[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

3 秦敏;白文元;谭莉莉;;白藜芦醇抑制人肝癌细胞增殖与促进其凋亡的作用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

4 钟宁;董明;程宝泉;张尚忠;李延青;;大蒜素和阿霉素对裸小鼠皮下移植肝癌细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

5 陶立平;陶佳南;陶富山;;宽带中远红外线辐射对肝癌细胞增殖细胞核抗原的研究[A];第八届全国红外加热暨红外医学发展研讨会论文及论文摘要集[C];2001年

6 刘珊林;;抗氧化干预对肿瘤生长和肝癌细胞增殖的抑制作用研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

7 高金亭;郑树森;梁廷波;吴丽花;余松峰;金晶;吴李鸣;徐世国;;环孢素A和他克莫司联合表阿霉素对肝癌细胞增殖、凋亡的影响[A];2005年浙江省器官移植学术会议论文汇编[C];2005年

8 高金亭;郑树森;梁廷波;吴丽花;余松峰;金晶;吴李鸣;徐世国;;环孢素A和他克莫司联合表阿霉素对肝癌细胞增殖、凋亡的影响[A];2005年浙江省外科学术会议论文汇编[C];2005年

9 任开环;邵荣光;;MR-1基因功能研究:促进肝癌细胞增殖、粘附和迁移[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年

10 巴一;吴雄志;谢广茹;陈丹;王伟;;守宫硫酸多糖对人肝癌细胞增殖与分化的影响[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

相关重要报纸文章 前2条

1 何德功;日发现致肠癌和肝癌细胞增殖的酶[N];中国劳动保障报;2004年

2 ;乙型肝炎病毒x蛋白对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响[N];中国医药报;2003年

相关博士学位论文 前10条

1 杨思俊;癌基因RMP与抑癌基因PTEN的相互拮抗作用及其对肝癌细胞增殖的影响[D];苏州大学;2015年

2 王贵明;SOX18基因对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭作用的研究[D];山西医科大学;2016年

3 崔静;ARK5在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响[D];郑州大学;2016年

4 黄健;1,25-二羟维生素D3下调HDAC2抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡的作用及机制研究[D];贵州医科大学;2016年

5 张茂;miR-217负调控MTDH抑制肝癌细胞增殖和侵袭等作用机制的研究[D];南方医科大学;2017年

6 周彦明;曲格列酮抑制肝癌细胞增殖及其作用机制的实验研究[D];第二军医大学;2007年

7 崔越宏;17AAG对肝癌细胞增殖转移的抑制及其机制的研究[D];复旦大学;2011年

8 魏双;Ku80分子对人肝癌细胞增殖的影响及其机制的研究[D];华中科技大学;2011年

9 孙慧燕;Hsa-miR-486-5p抑制肝癌细胞增殖及侵袭的作用及机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年

10 路欣;HSD17B4促进肝癌细胞增殖及其机制的研究[D];河北医科大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 杨海洋;钙通道蛋白STIM1&Orai1对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭作用的初步研究[D];福建医科大学;2015年

2 彭云云;NLRC5靶向Wnt/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的功能及机制研究[D];安徽医科大学;2015年

3 黄道斌;葡萄糖调节蛋白78对肝癌细胞增殖、自噬及体外血管生成的影响[D];南昌大学医学院;2015年

4 周勇;TLR4调控肿瘤增殖相关蛋白CDK4、CDK6对HBV相关性肝癌细胞增殖的作用[D];南昌大学医学院;2015年

5 严晓娣;shRNA干预IGF-I受体活化对肝癌细胞增殖抑制及其分子机制研究[D];南通大学;2014年

6 吴国慧;Wnt10b基因失活对人肝癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的影响[D];桂林医学院;2015年

7 代航;MicroRNA-30a-5p对肝癌细胞增殖凋亡及侵袭转移的实验研究[D];重庆医科大学;2015年

8 肖泽林;乙肝病毒X蛋白通过SPHK1促进肝癌细胞增殖的作用及其分子机制的研究[D];南开大学;2015年

9 武承凤;MIF通过ERK信号通路对肝癌细胞增殖的实验研究[D];甘肃中医药大学;2016年

10 王晓锋;Wdr5通过Wnt通路促进肝癌细胞增殖的研究[D];兰州大学;2016年

本文编号：2658473