白花蛇舌草总黄酮联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及可能机制

发布时间：2020-05-13 17:02

【摘要】：目的:以肺癌A549细胞作为研究对象,探讨白花蛇舌草总黄酮与顺铂联合对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法:用体外培养法培养肺癌A549细胞,采用对数期的肿瘤细胞进行该项试验,随机分为四个实验组:阴性对照组;白花蛇舌草总黄酮组;顺铂组;联合组(白花蛇舌草总黄酮+顺铂组)。采用MTT法来检测白花蛇舌草总黄酮、顺铂两种药物单用及二者联合应用对肺癌A549细胞增殖的影响,并采用Q值公式来进行评估两药联合干预的作用效果;给予流式细胞分析仪检查并测定两种干预药物对于细胞的分化周期以及细胞的凋亡率的作用效果;RT-PCR技术检测凋亡相关蛋白p-AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bax m RNA的表达水平;Western bloting检测p-AKT、Caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。结果:1、与阴性对照组对比,白花蛇舌草总黄酮组、顺铂组对肺癌A549细胞的增殖呈现时间-浓度依赖抑制作用,差异存在统计学意义(P0.05);联合组优于白花蛇舌草总黄酮组、顺铂组,差异存在统计学意义(P0.05);两药联合干预的作用表现为单纯相加。2、在使用药物干预肺癌A549细胞48小时以后,白花蛇舌草总黄酮组G1期细胞的比例升高,S、G2期细胞比例下降,与阴性对照组比较差异存在统计学意义(P0.05);顺铂组S期比例升高,与阴性对照组比较差异存在统计学意义(P0.05);与阴性对照组及顺铂组比较,联合组G1期细胞比例升高,与阴性对照组及白花蛇舌草总黄酮组比较,联合组S期比例升高,差异存在统计学意义(P0.05)。白花蛇舌草总黄酮及顺铂均能诱导肺癌A549细胞凋亡,白花蛇舌草总黄酮组、顺铂组凋亡率分别为(10.870±0.442)%、(16.648±0.307)%,与正常对照组[(1.152±0.275)%]比,差异存在统计学意义(P0.05),联合组的A549细胞凋亡率[(19.856±0.649)%],比白花蛇舌总黄酮组、顺铂组有增加,差异存在统计学意义。3、与阴性对照组对比,白花蛇舌草总黄酮组、顺铂组明显抑制肺癌A549细胞p-AKT、BCL-2表达(P0.05),明显促进Caspase-9、Bax蛋白的表达(P0.05);与阴性对照组和单一药物干预组相比较,联合组的协同作用更强,差异存在统计学意义(P0.05)。结论:1、白花蛇舌草总黄酮、顺铂均具有抑制肺癌A549细胞增殖及促进细胞凋亡的作用,两药联合作用明显加强。2、白花蛇舌草总黄酮联合顺铂促进肺癌A549细胞的凋亡的机制可能是通过降低p-AKT的表达程度,从而增强Caspase-9的表达程度、下调Bcl-2的表达程度、上调Bax的表达程度,升高Bax/Bcl-2的比值。
【图文】：

3.3 白花蛇舌草总黄酮联合顺铂对肺癌 A549 细胞 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 及蛋白表达的影响3.3.1 白花蛇舌草总黄酮、顺铂对肺腺癌 A549 细胞 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax mRNA 表达的影响白花蛇舌草总黄酮、顺铂均可以抑制 p-AKT、BCL-2 mRNA 的表达，促进肺腺癌 A549 细胞 Bax、Caspase-9 mRNA 表达，并且差异存在统计学意义（P<0.05）。白花蛇舌草总黄酮与顺铂联合作用效果更强，与单一药物组相比较，，差异存在统计学意义（P<0.05），见图 3.3.1.1。应用电脑图像分析系统分析 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 和内参 Actin 之间的灰度值，pAKT/Actin、Caspase-9/Actin、BCL-2/Actin、Bax/Actin 灰度值比值见表3.3.1、图 3.3.1.2。逡逡

图 3.3.1.2 FHD、DDP 对 A549 细胞 p-AKT、caspase-9 、BCL-2、Bax mRNA 表达的比较3.3.2 FHD、DDP 对 A549 细胞 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 蛋白表达水平的影响同阴性对照组相比较，白花蛇舌草总黄酮、顺铂均可以明显降低 p-AKT、BCL-2 蛋白的表达水平，提高促凋亡蛋白 Caspase-9、Bax 蛋白的表达。与阴性对照组以及单一用药组相比较，联合用药组作用效果更明显，差异存在统计学意义（P<0.05），见图 3.3.2.1。应用电脑图像分析系统分析 p-AKT、Caspase-9、BCL-2、Bax 和内参 Actin 的灰度值，p-AKT/Actin、Caspase-9/Actin、BCL-2/Actin、Bax/Actin 灰度值比值见表 3.3.2、图 3.3.2.2。00.10.2对照组 FHD组 DDP组 FHD+DDP组
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

【参考文献】

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本文编号：2662260