FAM135B在食管鳞癌中的功能及作用机制研究
发布时间：2020-05-16 01:24
【摘要】：食管癌是世界上第八大最常见的恶性肿瘤,全球每年有超过45万新发病例。根据病理类型不同,食管癌主要分为食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌,ESCC)和食管腺癌(EAC)。我国的食管癌以食管鳞癌为主,食管鳞癌的发病率和的肿瘤相关死亡率都占全部恶性肿瘤的第四位。课题组前期通过全基因组测序、全外显子测序和比较基因组杂交全面而系统地揭示了食管鳞癌的基因组改变情况,并且首次发现FAM135B是一个新的肿瘤相关基因。本课题以实验室前期研究成果为基础,以新基因FAM135B为研究对象,研究了其在食管鳞癌发生发展中的功能和作用机制,也为进一步研究其临床应用提供了理论依据。我们首先通过人食管鳞癌组织芯片的免疫组化染色研究FAM135B蛋白表达量和临床指标以及患者预后的关系,研究发现FAM135B蛋白在食管鳞癌细胞胞浆中的表达量显著高于癌旁对照,并且其表达量和患者的生存预后显著相关,揭示了FAM135B的重要临床意义。接下来通过细胞实验,我们发现稳定高表达FAM135B可增强食管鳞癌细胞的恶性表型,包括增殖、克隆形成、细胞周期进展以及对顺铂诱导凋亡的抵抗。裸鼠皮下的增殖实验证明FAM135B能显著增强食管鳞癌细胞在体内增殖能力。然后我们通过免疫共沉淀和质谱鉴定的方法获得了和FAM135B相互作用的蛋白,并利用免疫荧光、western blot、流式细胞仪和qPCR等方法研究了FAM135B在食管鳞癌中促癌的作用机制。免疫共沉淀和质谱分析结果表明FAM135B和GRN具有相互作用。信号通路分析表明FAM135B通过促进GRN的分泌从而活化PI3K/AKT/mTOR通路,最终起到促进肿瘤增殖和对顺铂耐药的作用。在此过程中FAM135B和GRN形成正反馈,增强各自的促癌作用,并且这一作用可以被mTOR的抑制剂雷帕霉素和GRN的siRNA抑制。由于GRN是一个重要的生长因子,有大量报道证明其在肝癌等癌种中发挥了重要功能,但是其在食管鳞癌里的研究并不多。细胞实验结果表明,GRN能促进食管鳞癌细胞增殖以及降低对顺铂的敏感性。为了研究GRN在食管鳞癌中的临床意义,我们利用人食管鳞癌组织芯片的免疫组化染色研究了 GRN蛋白表达量和临床指标以及患者预后的关系,研究发现GRN在食管鳞癌组织中的表达量显著高于癌旁对照,并且虽然GRN蛋白和食管鳞癌患者的生存预后不具有显著相关性,但是同时高表达FAM135B和GRN的患者生存预后显著变差,五年生存率为0,COX回归分析还表明同时高表达FAM135B和GRN可以作为是食管鳞癌独立的预后因素。此外,我们还通过构建FAM135B高表达转基因小鼠观察了 FAM135B对小鼠发育和自发成瘤的影响,并利用化学药物4-NQO诱导食管癌发生模型,研究FAM135B在此过程中的作用。演技结果表明FAM135B转基因小鼠易于自发多种肿瘤,包括肝癌、卵巢癌等。在4-NQO诱导下,转基因小鼠形成的食管肿瘤显著多于对照小鼠,且小鼠的生存期显著缩短。最后,通过ELISA试剂盒检和Western blot检测食管鳞癌细胞分泌的GRN水平和小鼠血清中GRN水平,发现FAM135B高表达后,食管鳞癌细胞分泌的GRN显著增加,转基因小鼠血清中GRN水平也显著高于对照。这一结果提示血清中GRN可能具有一定临床诊断和复发监测的意义。本课题研究了 FAM135B及其相互作用蛋白GRN在食管鳞癌中的功能和作用机制,同时也初步研究了两者和临床指标的相关性,为进一步研究其应用价值提供了理论基础。
【图文】：
食管癌是世界上第八大最常见的恶性肿瘤，全球每年有超过４５万新发病例逡逑［Ｆｅｒｌａｙｅｔａｌ．，邋２０１５］。食管癌相关死亡率在全部癌症相关死亡率中排名第六，是发病逡逑率和死亡率都很高的恶性肿瘤（图１）。根据病理类型不同，食管癌主要可以分为两逡逑类：食管淲状细胞癌（简称食管淲癌，，ＥＳＣＣ）和食管腺癌（ＥＡＣ）。近年来食管腺逡逑癌的发病率有所升高，但食管淲状上皮细胞癌仍然是占比最大的食管癌［Ｐｅｎｎａｔｈｕｒｅｔ逡逑ａｌ．，２０１３］。逡逑Ｅｓｔｉｍａｔｅｄ邋ｎｕｍｂｅｒ邋（ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ邋ａｎｄ邋ｍｏｒｔａｌｉｔｙ），邋ｂｏｔｈ邋ｓｅｘｅｓ，邋（ｔｏｐ邋１０邋ｃａｎｃｅｒ邋ｓｉｔｅｓ）邋ｉｎ邋２０１２逡逑Ｉ逦■邋ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ逡逑■邋Ｍｏｒｔａｌｌｔｙ逦Ｗｏｒｌｄ逦Ｃｈｉｎａ逡逑Ｌｕｎｇ逡逑Ｃｏｌｏｒｅｃｔｕｍ逡逑｜逦Ｂｒｅａｓｔ逡逑Ｓｔｏｍａｃｈ逡逑＿邋—逡逑Ｐｒｏｓｔａｔｅ逡逑Ｏｅｓｏｐｈａｇｕｓ逡逑Ｃｅｒｖｉｘ邋ｕｔｅｒｉ逡逑悘Ｉ逡逑Ｐａｎｃｒｅａｓ逡逑Ｌｅｕｋａｅｍｉａ逡逑２００００００．０邋１００００００．０邋0！0邋１００００００．０邋２００００００．０逡逑_瀇瀗龋登淇郑澹祝猓鳎颍觯幔簦铮颍澹ǎ瑁酰疱澹纾恪＃ィ妫颍瘟耍掊澹恳诲澹咭诲义希翦澹桑睿簦澹恚停椋铮睿幔戾澹粒纾澹睿悖澹妫铮蝈澹遥澹螅澹幔颍悖桢澹铮铄澹茫幔睿悖澹蝈澹玻埃保稿危恚殄义贤迹比蚝椭泄闹琢龇⒉÷屎退劳雎叔义希疲椋纾酰颍邋澹卞澹茫幔睿悖澹蝈澹恚铮颍猓椋洌椋簦澹幔睿溴澹洌澹幔簦桢澹颍幔簦邋澹幔颍铮酰睿溴澹簦瑁邋澹鳎铮颍欤溴澹幔睿溴澹椋铄澹茫瑁椋睿徨义现泄鞘彻馨┑母叻⒌厍
本文编号：2665929
【图文】：
食管癌是世界上第八大最常见的恶性肿瘤，全球每年有超过４５万新发病例逡逑［Ｆｅｒｌａｙｅｔａｌ．，邋２０１５］。食管癌相关死亡率在全部癌症相关死亡率中排名第六，是发病逡逑率和死亡率都很高的恶性肿瘤（图１）。根据病理类型不同，食管癌主要可以分为两逡逑类：食管淲状细胞癌（简称食管淲癌，，ＥＳＣＣ）和食管腺癌（ＥＡＣ）。近年来食管腺逡逑癌的发病率有所升高，但食管淲状上皮细胞癌仍然是占比最大的食管癌［Ｐｅｎｎａｔｈｕｒｅｔ逡逑ａｌ．，２０１３］。逡逑Ｅｓｔｉｍａｔｅｄ邋ｎｕｍｂｅｒ邋（ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ邋ａｎｄ邋ｍｏｒｔａｌｉｔｙ），邋ｂｏｔｈ邋ｓｅｘｅｓ，邋（ｔｏｐ邋１０邋ｃａｎｃｅｒ邋ｓｉｔｅｓ）邋ｉｎ邋２０１２逡逑Ｉ逦■邋ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ逡逑■邋Ｍｏｒｔａｌｌｔｙ逦Ｗｏｒｌｄ逦Ｃｈｉｎａ逡逑Ｌｕｎｇ逡逑Ｃｏｌｏｒｅｃｔｕｍ逡逑｜逦Ｂｒｅａｓｔ逡逑Ｓｔｏｍａｃｈ逡逑＿邋—逡逑Ｐｒｏｓｔａｔｅ逡逑Ｏｅｓｏｐｈａｇｕｓ逡逑Ｃｅｒｖｉｘ邋ｕｔｅｒｉ逡逑悘Ｉ逡逑Ｐａｎｃｒｅａｓ逡逑Ｌｅｕｋａｅｍｉａ逡逑２００００００．０邋１００００００．０邋0！0邋１００００００．０邋２００００００．０逡逑_瀇瀗龋登淇郑澹祝猓鳎颍觯幔簦铮颍澹ǎ瑁酰疱澹纾恪＃ィ妫颍瘟耍掊澹恳诲澹咭诲义希翦澹桑睿簦澹恚停椋铮睿幔戾澹粒纾澹睿悖澹妫铮蝈澹遥澹螅澹幔颍悖桢澹铮铄澹茫幔睿悖澹蝈澹玻埃保稿危恚殄义贤迹比蚝椭泄闹琢龇⒉÷屎退劳雎叔义希疲椋纾酰颍邋澹卞澹茫幔睿悖澹蝈澹恚铮颍猓椋洌椋簦澹幔睿溴澹洌澹幔簦桢澹颍幔簦邋澹幔颍铮酰睿溴澹簦瑁邋澹鳎铮颍欤溴澹幔睿溴澹椋铄澹茫瑁椋睿徨义现泄鞘彻馨┑母叻⒌厍
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