miR-301a靶向SOCS5调节JAK-STAT3信号通路参与胰腺癌侵袭转移

发布时间：2020-05-20 23:10

【摘要】：目的:研究胰腺癌在侵袭与转移的过程miR-301a起到的作用及具体机制。方法:1.应用TCGA数据库验证miR-301a表达水平与胰腺癌TNM分期及发生远处转移的相关性;2.收集来自胰腺癌患者和正常对照血奖标本,并且通过qRT-PCR检测miR-301a的相对表达量;收集并检测胰腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织标本中miR-301a的相对表达差异;3.应用脂质体转染技术将miR-301a的mimic或inhibitor转染至胰腺癌细胞,通过Transwell侵袭迁移实验、划痕实验以及小管形成实验检测胰腺癌细胞系侵袭转移能力是否改变;4.用bioinformatics软件Miranda、PicTar、TargetScan等预测miR-301a的靶基因,通过KEGG信号通路分析,以探索miR-301a的靶基因的潜在信号通路,并用双荧光素酶报告基因技术验证miR-301a直接靶向SOCS5;5.将SOCS5 siRNA或SOCS5过表达质粒转染到胰腺癌细胞PANC1,并检测SOCS5敲低或过表达后胰腺癌细胞PANC1侵袭转移及小管形成的能力;6.利用western blot技术检测miR-301a mimic或inhibitor转染后,胰腺癌细胞中miR-301a的靶基因SOCS5及下游JAK-STAT3信号通路相关蛋白的表达情况。7.利用siRNA基因干扰技术或过表达质粒转染技术将SOCS5 si RNA或SOCS5过表达质粒转染到胰腺癌细胞并检测SOCS5经敲低或过表达后胰腺癌细胞系miR-301a的靶基因SOCS5及下游JAK-STAT3信号通路相关蛋白的表达情况;结果:1.miR-301a与胰腺癌临床分期和胰腺癌远处转移相关;2.miR-301a在胰腺癌组织中的表达高于癌旁组织,miR-301a在胰腺癌血浆中的表达明显高于正常对照血浆,miR-301a在胰腺癌远处转移患者血浆中的表达显著高于未远处转移组,对比术前,在胰腺癌患者术后血浆中miR-301a表达量下降。3.在胰腺癌细胞系中高表达miR-301a,促进胰腺癌细胞迁移和侵袭以及小管形成能力;4.在胰腺癌细胞系中抑制miR-301a的表达,抑制胰腺癌细胞迁移和侵袭以及小管形成能力;5.生物信息学软件软件预测SOCS5是miR-301a潜在的靶向基因之一,报告基因技术证实miR-301a直接靶向SOCS5 3’UTR;6.抑制SOCS5能对胰腺癌细胞的侵袭转移和小管形成发挥促进作用,而SOCS5过表达直接抑制这些效应,主要机制通过抑制JAK-STAT3信号通路,间接下调MMP9、VEGF蛋白分子,而且上调E-cadherin蛋白分子。结论:胰腺癌患者miR-301a表达升高,并通过mi R-301a SOCS5 JAK-STAT3这个信号通路促进胰腺癌转移的形成。
【图文】：

胰腺癌,患者

果-301a 在胰腺癌中表达升高 miR-301a 在胰腺癌发生转移过程如何发挥作用,我们癌组织和癌旁组织样本和 5 例胰腺癌患者的血浆 miR-A，B）。miR-301a 在上述标本中上调，胰腺癌患者血浆中胰腺癌组织一致。其次，我们通过对 63 例胰腺癌患检测 miR-301a 的含量，并观察患者血浆中 miR-301a，P<0.001)。另外，，我们收集了十例胰腺癌患者术前术后 miR-301a 的相对表达量（图 1D）。我们将 miR-301a 临界值，将 63 例患者分为 miR-301a 表达量高、低两组a 表达与 TNM 分期显著相关(P=0.0169)，但与患者年龄

曲线,胰腺癌,数据库分析,患者预后

20 例 IV 期胰腺癌患者(图 2 B)。此外，Ka miR-301a 的患者预后与低表达 miR-301a 的胰2C)。定量 PCR 分析，检测胰腺癌细胞系 miR-301 系 (PANC-1, BXPC-3, Aspc-1, Mia-Paca-2, 明显高于胰腺上皮细胞系 H6C7(图 2D)， m皮细胞系 H6C7。接下来，我们将 miR-301a9-9 (CA19-9)水平进行比较，以检测对胰腺癌1a 的 ROC 曲线曲线下面积为 0.724，高于 CA，这些数据支持 miR-301a 表达在胰腺癌患者可以作为诊断和预后的生物标志物。
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.9

【参考文献】