NIPAL1和GRHL1在食管鳞状细胞癌的临床意义及其作用机制初步研究

发布时间：2020-05-27 08:33

【摘要】：第一章:NIPAL1在食管鳞状细胞癌的临床意义及其作用机制初步研究研究背景及目的食管癌是最常见的第八大癌症类型,也是全球第六大常见癌症相关死亡原因[1]。在美国和其他西方国家,约50%的食管癌是腺癌。然而,在亚洲国家,大约90%的食管癌是鳞状细胞癌(SCC),并且SCC是食管癌的主要组织学亚型,占全世界所有食管癌的80%[2]。目前,与食管鳞癌侵袭及转移相关的分子机制尚不清楚。因此,研究者们致力于深入挖掘这些有功能的生物标记物在食管鳞癌中发生发展机制,因为这些标记物可以使食管鳞状细胞癌(ESCC)患者能更准确地分层,帮助临床医生做出最佳治疗决策,从而改善患者预后。本课题组对3例ESCC患者的肿瘤组织及其癌旁正常食管上皮组织通过第二代深度测序技术进行全转录组测序。测序结果显示NIPAL1是显著下调基因之一,除了口腔鳞癌,NIPAL1在其他肿瘤中的表达及功能尚未有人报道。因此研究NIPAL1在食管鳞癌中的作用及机制是非常有必要的。研究方法1.临床标本的收集:包括60例食管鳞癌患者新鲜组织标本和299例食管鳞癌患者石蜡包埋组织样本。2.方法通过qRT-PCR检测NIPAL1在60例食管鳞癌及其癌旁正常食管上皮组织中NIPAL1的表达情况;通过免疫组化检测NIPAL1在299对食管癌组织芯片中的表达水平,并分析NIPAL1的表达水平与临床病理特征及预后的相关性。通过慢病毒(Lentivirus)载体成功构建稳定表达NIPAL1的食管癌细胞株EC109和EC9706。同时成功构建稳定敲降NIPAL1(shRNA)的食管癌细胞株KYSE510,通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验和裸鼠皮下成瘤实验研究NIPAL1对细胞体内外生长的影响;并通过transwell侵袭及迁移实验和裸鼠尾静脉肺转移模型研究NIPAL1对细胞侵袭及迁移能力的影响;在NIPAL1分子机制研究中,我们应用western blotting、流式细胞术、F-actin、免疫荧光、JC-1、活细胞成像等实验,分析并探讨NIPAL1抑制肿瘤生长及转移的机制。研究结果结果显示NIPAL1在食管鳞癌组织及大部分细胞株中普遍表达降低。同时NIPAL1低表达与ESCC患者的临床分期(TNM)、淋巴结转移及预后显著相关。体内外功能实验显示NIPAL1可有效抑制食管癌细胞增殖及迁移能力。机制研究结果显示:1.NIPAL1通过负调控p-CDC2,使G2/M期发生阻滞;2.NIPAL1通过下调Bcl-2,促进细胞凋亡;3.NIPAL1通过负调控slug表达,抑制ESCC细胞的迁移;结论NIPAL1在食管鳞状细胞癌中具有抑制肿瘤增殖及侵袭转移的功能,通过阻滞细胞G2/M期,抑制细胞有丝分裂及减少细胞骨架中丝状伪足和板状伪足形成发挥抑癌基因作用。第二章:抑癌基因GRHL1在食管鳞状细胞癌中临床意义及功能初步研究研究背景及目的GRHL1是作为GRHL家族的成员主要编码转录因子,既往研究表明GRHL1有抑制肿瘤细胞克隆形成,增殖及体内成瘤能力。本研究旨在评估GRHL1在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达和预后关系。研究方法通过定量RT-PCR,琼脂糖凝胶电泳和Western印迹(Western Blotting,WB)等实验检测GRHL1在ESCC细胞系和临床ESCC组织中的表达水平。对266例食管癌石蜡组织标本进行免疫组织化学染色,应用cox回归分析GRHL1和临床病理因素与患者的预后关系。通过构建GRHL1过表达及敲除的慢病毒载体评估GRHL1在ESCC细胞系中的功能。研究结果在大多数ESCC细胞系和临床组织样本中,GRHL1的mRNA和蛋白质水平都表达下调。GRHL1的低表达与肿瘤侵袭深度(P = 0.008),临床分期(P =0.004)和患者死亡(P0.001)等因素具有相关性。此外,Kaplan-Meier生存曲线结果显示,GRHL1的低表达的患者术后总生存期(Overall Survival,OS)显著降低(log-rank test,P0.001,HR,2.073;95%CI,1.491-2.881)。此外,Cox多因素分析显示,GRHL1低表达和肿瘤分化程度是ESCC患者独立预后因素(均P0.05)。此外,GRHL1过表达细胞可发挥体外抑制ESCC细胞侵袭的能力,敲降GRHL1后ESCC的侵袭能力增强。结论GRHL1低表达与食管鳞癌患者预后较差相关,过表达GRHL1可抑制食管鳞癌细胞侵袭能力。GRHL1可作为一个独立预后标志,并且有望成为治疗ESCC的新型潜在靶点。
【图文】：

逦第一章ＮＩＰＡＬ１在食管鳞状细胞癌中的临床意义及其作用机制初步研究逦逡逑为／进－步探究ＮＩＰＡＬ１低表达对食管淲癌患者预后的影响，我们通过单因逡逑素生存分析（ｌｏｇ邋－邋ｒａｎｋ邋ｔｅｓｔ邋）来绘制Ｋａｐｌａｎ邋－邋Ｍｅｉｅｒ生存曲线图，结果显示：逡逑ＮＩＰＡＬ１低表达组（ｎ邋＝邋１３４）患者的中位生存时间为１８个月，，而高表达组逡逑（ｎ邋＝邋１２３邋）患者的中位生存T间为２９个月，差异具有统计学意义（Ｐ＜邋０．００１，图逡逑２）。逡逑除此之外，肿瘤分化程度（Ｐ＜０．００１）、淋巴结转移（Ｐ＜０．００１）、肿瘤浸润逡逑（Ｐ＜０．００１）、临床分期（Ｐ＜０．００１）均与患者的总生存时间存在显著的相关性，逡逑而其年龄与性别则与之无明显关系（表２）。逡逑

第四ＦＩ开始，不一样组别的细胞生长速度开始有显著差异（Ｐ＜０．０００１邋），这意逡逑味着食管癌细胞的增殖受到过表达ＮＩＰＡＬｌ的抑制；将ＮＩＰＡＬ１敲降后，则能够逡逑加快食管癌细胞的生长速率。见图３－３逡逑３６逡逑
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.1

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本文编号：2683257