DADS上调RORα增强SGC-7901细胞对5-FU的化疗敏感性

发布时间：2020-05-30 21:19

【摘要】：目的:研究DADS上调RORα表达是否能增强SGC-7901、SGC-7901/VCR和SGC-7901/T0901317细胞凋亡和对5-FU的敏感性。方法:RORα抑制剂T0901317处理SGC-7901细胞构建RORα低表达SGC-7901细胞。DADS处理SGC-7901、SGC-7901/VCR、SGC-7901/T0901317与不同5-FU浓度处理下,MTT检测各组SGC-7901细胞增殖抑制率的变化水平。流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡率变化情况。免疫荧光及Western blot检测各组SGC-7901细胞中Bcl-2、XIAP、Caspase-3、P-gp蛋白表达水平。结果:1.RORα低表达SGC-7901细胞的构建采用RORα抑制剂T0901317处理SGC-7901细胞后,Western blot检测结果显示,RORα蛋白表达较SGC-7901细胞明显减少(P0.05).DADS处理SGC-7901/T0901317,RORα表达水平明显增高(P0.05)。2.DADS及下调RORα对SGC-7901细胞系增殖能力的影响MTT结果显示:分别用浓度为1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L的5-Fu处理后,SGC-7901的增殖抑制率分别为1.95%、5.09%、13.43%、22.87%、46.63%,DADS处理后的SGC-7901组抑制率明显增高,分别为4.33%、9.85%、22.5%、48.17%、57.44%(P0.05)。SGC-7901/VCR的增殖抑制率分别为0.18%、0.59%、1.01%、2.82%、4.69%(P0.05)。SGC-7901/VCR组用DADS处理后,其抑制率明显增高,分别为2.23%、3.31%、7.3%、19.43%、27.91%(P0.05)。SGC-7901/T0901317组增殖抑制率分别为:1.24%、4.3%、11.83%、18.34%、40.89%,与SGC-7901组相比,增殖抑制率明显降低(P0.05)。DADS处理后SGC-7901/T0901317组的抑制率2.24%、8.7%、19.54%、40.83%、52.34%明显增高(P0.05)。结果提示:下调RORα表达可以增强细胞增殖能力,一定程度上增加了细胞对5-FU的耐药性。DADS可以抑制SGC-7901、SGC-7901/VCR和SGC-7901/T0901317的细胞增殖能力,一定程度上降低细胞对5-Fu的耐药性。3.DADS及下调RORα对SGC-7901细胞凋亡的影响流式细胞仪检测显示,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317组凋亡率分别为6.8%、1.7%、2.91%。SGC-7901/VCR与SGC-7901/T0901317组较SGC-7901组凋亡率明显减少(P0.05)。DADS处理后,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317组凋亡率分别为12.66%、7.88%、9.54%,较未处理组细胞凋亡率明显增加(P0.05)。说明RORα低表达可以减少SGC-7901细胞的凋亡,DADS可增加SGC-7901细胞的凋亡。4.DADS及下调RORα对SGC-7901细胞相关蛋白表达的影响Western blot检测结果显示,T0901317处理后的SGC-7901组较未处理SGC-7901组Bcl-2、P-gp、XIAP表达明显上调(P0.05),Casepase3蛋白表达明显下调(P0.05)。DADS处理后,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317组较未处理组Bcl-2、P-gp、XIAP蛋白表达明显下调(P0.05),Casepase3蛋白表达明显上调(P0.05)。免疫荧光显示,T0901317处理后的SGC-7901组较未处理SGC-7901组Bcl-2、P-gp、XIAP荧光增强,Casepase3荧光减弱。DADS处理后,SGC-7901、SGC-7901/VCR及SGC-7901/T0901317组较未处理组Bcl-2、P-gp、XIAP荧光减弱,Casepase3荧光增强。免疫荧光与Western blot结果提示的结论一致,说明耐药相关蛋白及抑制凋亡蛋白可以通过RORα低表达上调,而促凋亡蛋白可通过RORα低表达下调。DADS处理细胞后,耐药相关蛋白及凋亡蛋白表达水平下调,促凋亡蛋白的表达水平上调。结论:1.RORα低表达可上调Bcl-2、P-gp、XIAP与下调Casepase3表达,抑制细胞凋亡,从而降低SGC-7901细胞对5-FU的化疗敏感性。2.DADS可通过上调RORα下调Bcl-2、P-gp、XIAP与上调Casepase3表达,促进细胞凋亡,增加SGC-7901细胞对5-FU的化疗敏感性。
【图文】：

tern blot 检测 SGC-7901 实验组及对照组细胞系 RORα 蛋白Group The gray valueSGC-7901 0.775±0.02SGC-7901/T0901317 0.224±0.015*GC-7901/T0901317+DADS 0.483±0.019#*P<0.05 VS SGC-7901；#P<0.05 vs SGC-7901/T0901317度 5-Fu 处理后，DADS 及下调 RORα 对 5 细胞增殖的影响表 3-3，图 3-2 所示，根据实验得到的 OD 值可计算出estern blot 检测 SGC-7901 实验组及对照组细胞系 RORα 蛋1: SGC-7901; 2: SGC-7901/T0901317; 3: SGC-7901/T0901317+*P<0.05 VS SGC-7901；#P<0.05 vs SGC-7901/T0901317

3 DADS 及下调 RORα 对 SGC-7901 细胞凋亡的影响流式细胞学检测分析 DADS 及下调 RORα 对 SGC-7901 细胞凋亡的影 3-3、图 3-4，表 3-4 所示，SGC-7901/VCR 和 SGC-7901/T0901317 组（+晚期凋亡）凋亡率分别为 1.7%与 2.91%，，明显低于对照组 SGC-7901<0.05)，表明 RORα 低表达可抑制细胞凋亡。DADS 处理后，SGCC-7901/VCR 及 SGC-7901/T0901317 组的凋亡率分别明显增加到 128%和 9.54% (P<0.05)，表明 DADS 能够促进细胞凋亡。1 2
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2

【参考文献】

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本文编号：2688736