SALL4调控TGF-β1促胃癌转移作用和机制研究

发布时间：2020-06-02 13:23

【摘要】：目的:探讨人婆罗双树样基因4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)在胃癌转移和胃癌细胞EMT中的作用及机制,为阐明SALL4促胃癌转移作用提供理论基础和实验依据,并为胃癌分子诊断和治疗提供新的靶点。方法:分别采用慢病毒介导SALL4干扰shRNA和SALL4过表达质粒转染人胃癌细胞MGC803和HGC27,采用qRT-PCR验证SALL4基因敲减和过表达效率。采用平板克隆实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验评价细胞运动能力,采用Transwell迁移和Matrigel侵袭实验评价细胞迁移以及侵袭能力,采用q RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞中EMT相关基因和蛋白表达。通过基因芯片筛选和qRT-PCR检测SALL4敲减后MGC-803细胞TGF-β1基因表达变化。在过表达SALL4同时采用siRNA干扰TGF-β1,阐明TGF-β1在SALL4促胃癌转移和EMT中的作用。结果:慢病毒介导shRNA转染MGC-803细胞后,qRT-PCR和western blot结果显示SALL4表达降低。平板克隆实验和划痕实验结果显示细胞增殖和运动能力下降,Transwell迁移和Matrigel侵袭实验结果显示细胞迁移和侵袭能力下降。qRT-PCR和western blot结果表明E-cadherin基因和蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、slug和twist基因和蛋白表达下降。相反,SALL4过表达质粒转染HGC-27细胞后,SALL4表达升高,细胞增殖、运动、迁移和侵袭能力增强,E-cadherin基因和蛋白表达下降,N-cadherin、vimentin、slug和twist基因和蛋白表达上升。SALL4基因敲减导致TGF-β1基因表达下调,并得到Western blot结果证实。SALL4基因敲减抑制而SALL4过表达促进SMAD2/3磷酸化。干扰TGF-β1基因表达导致SALL4促胃癌细胞迁移和侵袭以及EMT发生能力明显下降。结论:SALL4通过激活TGF-β/SMAD信号通路,诱导胃癌细胞发生EMT,促进其转移能力。SALL4调控TGF-β1是其在胃癌中发挥促转移作用的新机制。
【图文】：

慢病毒,基因表达水平,转染效率,荧光显微镜

SALL4 调控 TGF-β 促胃癌转移作用和机制研究果A 干扰 SALL4 表达效率检测毒介导的 shRNA 干扰 MGC-803 细胞中 SALL4 表达。慢微镜观察发现，，sh-Ctrl 与 sh-SALL4 敲减组都能观察到很染效率较高（图 3.1A)。qRT-PCR 结果表明，与 sh-Ctrl 相比，sRNA 表达显著下降，为对照组的 43%(图 3.1B)。Western bl照组相比，干扰组 SALL4 蛋白表达显著降低（图 3.1C）介导 shRNA 转染显著抑制 MGC-803 细胞中 SALL4 表达

表达抑制,体外增殖,空白,划痕实验

图 3.2 干扰 SALL4 表达抑制 MGC-803 细胞体外增殖能力Fig 3.2 SALL4 knockdown inhibits the proliferation of MGC-803 cellsSALL4 敲减对 MGC-803 细胞迁移能力的影响过划痕实验和 Transwell 迁移实验检测 SALL4 基因敲减后 MGC-80迁移能力变化。结果表明，与空白组以及 sh-Ctrl 组相比，sh-SAL-803 细胞的运动能力明显降低（图 3.3A)。在 Transwell 迁移实验中，与空白组以及 sh-Ctrl 组相比，sh-SALL4 组在相同时间内迁移到胞数量减少（图 3.3B)。表明干扰 SALL4 表达后，MGC-803 细胞力显著降低。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2

【参考文献】