Shkbp1对肺癌发生发展的作用及其机制研究

发布时间：2020-06-03 17:17

【摘要】：在癌症诊断和靶向治疗中,EGFR是癌基因这一观点被广泛认同。Shkbp1最近被发现,它是EGFR上游分子,可以保护EGFR免受降解。然而,在肿瘤生长过程中Shkbp1功能仍有待进一步研究。在本研究中,我们首先通过对来自TCGA数据库的494个匹配肺肿瘤组织和临近的非肿瘤组织的mRNA进行分析,发现Shkbp1与临床TNM的分期呈正相关。此外,通过利用免疫组化对肺癌组织芯片(125例)进行检测分析,发现其在临床肺癌样本中高表达,并且与淋巴结转移有关。机制上,利用Shkbp1敲除小鼠通过化学药物(乌拉坦)诱导建立肺腺癌自发模型,研究Shkbp1在肿瘤发生发展中的作用,其结果显示:与对照组小鼠比较,Shkbp1基因敲除小鼠的肺部肿瘤数量和体积均显著减少。为进一步探讨其机制,利用siRNA干扰将Shkbp1在其高表达的肺癌细胞系中沉默,同样,利用腺病毒载体将Shkbp1在其低表达的细胞系中过表达,通过一系列细胞功能实验表明:在肺癌细胞系中,降低Shkbp1的表达抑制了细胞的迁移和侵袭,反之亦然。此外,还通过蛋白芯片检测,结果提示沉默Shkbp1会影响EGFR信号通路。上述一系列结果表明:Shkbp1与肿瘤的迁移和侵袭密切相关。此外,除了肿瘤细胞表达Shkbp1之外,我们还发现Shkbp1蛋白在许多类型免疫细胞中高表达,因此,利用Shkbp1敲除小鼠通过皮下移植肿瘤模型和尾静脉转移模型,探讨免疫细胞缺失Shkbp1后是否会影响肿瘤的生长。结果表明,敲除Shkbp1能降低肿瘤小鼠的肿瘤生长速度,提示免疫细胞的Shkbp1缺失亦能影响肿瘤的生长。进一步通过流式细胞术,证明Shkbp1会影响部分免疫细胞的亚型变化。综上所述,得出以下结论:(1)Shkbp1在临床肺癌标本中高表达,且表达阳性率与肺癌的TNM分期呈正相关,与淋巴结转移相关;(2)Shkbp1敲除小鼠药物诱导肺癌,肿瘤的生长受到抑制;(3)沉默Shkbp1抑制了肺癌细胞的迁移和侵袭;Shkbp1过表达促进肺癌细胞的迁移和侵袭;(4)Shkbp1影响了上皮间充质转化,其过程涉及到EGFR信号通路;(5)免疫细胞的Shkbp1缺失亦可以抑制肿瘤的生长。本研究揭示了Shkbp1促癌转移的作用,为研究Shkbp1在临床诊断和靶向药物中的重要作用提供新的实验基础和理论依据。
【图文】：

鉴定图,小鼠,细胞冻存

图 2-1 Shkbp1-/-小鼠鉴定图2.2.2 细胞冻存与复苏（1）细胞冻存对处于对数期内的细胞，用 0.25%胰酶对细胞进行消化处理，用培养基终止消化反应后收集细胞，以 1000rpm，离心 4min，同时去掉上清。细胞的冻存液按 9：1（FBS：DMSO）的比例混匀制成单细胞悬液。将单细胞悬液放置于细胞冻存管中，然后将其放入程序降温细胞冻存盒，按温度梯度先冻存与-20℃，2h 后-80℃，12h 后转存于液氮罐中。（2）细胞复苏从液氮罐中取出冻存的细胞之后，，在 37℃的水浴锅中进行复温解冻，解冻之后，对冻存管用酒精进行消毒，收集细胞并离心，并用完全培养基重悬混匀细胞得到单细胞悬液，把制得的单细胞悬液移入培养皿中培养，待细胞贴壁后，更换新的培养基继续下一步培养。待细胞长满后可进行传代。

肺癌,癌症,临床特征,肿瘤发生

第三章实验结果第一部分表达于肺癌细胞上的 Shkbp1 对肿瘤发生发展的影响第一节.Shkbp1 在肺癌标本中表达情况和临床特征关系为了研究Shkbp1是否在肺癌中有一定功能以及明确Shkbp1在肺癌中潜在的临床意义。首先, 我们通过 TCGA 癌症数据库和 Protein atlas 网站对 Shkbp1 相关数据进行分析，了解 Shkbp1 在肿瘤组织中的表达情况：即是否在肺癌中高表达，是否发挥促进癌症的作用。明确其与临床分期的关系，明确其与生存率的关系。1.1 Shkbp1 RNA 水平在各癌种中的表达量
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

【参考文献】