MiRNA-103在非小细胞肺癌中通过调控PDCD10的表达发挥抑制肿瘤的作用
发布时间：2020-06-03 18:27
【摘要】：实验目的:目前,体内外实验研究已经证实了许多miRNA和靶基因之间存在着抑制信息通路,而靶基因多数为癌症相关基因。PDCD10(程序性细胞死亡因子10)是凋亡相关因子,调控细胞凋亡,最近一些研究表明,其与肿瘤的增殖、血管形成有关。PDCD10在非小细胞肺癌中,尤其在低分化肺癌中呈高表达。已经有研究证实在前列腺癌中miRNA-103通过抑制PDCD10的表达从而达到抑制肿瘤的作用。研究miRNA-103是否通过靶向调节PDCD10而发挥抑制肿瘤的作用,我们观察miRNA-103过表达或PDCD10基因沉默对非小细胞肺癌增值和侵袭能力的影响。本研究的目的是在非小细胞肺癌中miRNA-103是否也通过抑制PDCD10表达而达到抑制肿瘤的作用。实验方法:使用逆转录实时定量PCR检测32对人非小细胞肺癌组织及相应的癌旁正常组织中miRNA-103和PDCD10 m RNA的表达情况,并检测A549、SPCA1、H1299、NCI-4460、PC9、16HBE细胞中miRNA-103和PDCD10的表达。运用多个高通量数据库对miRNA-103的靶基因进行筛选,PDCD10为其中靶基因之一。将miRNA-103 mimics、negative control mimic(NC)、miRNA-103 inhibitor、pc DNA3.1 PDCD10或者negative control siRNA(pc DNA3.1)转染A549细胞,检测PDCD10的表达。Transwell实验研究结果体现出相应的结论,即103-mi R具备降低A549细胞活力的属性,能够有效地妨碍癌细胞的转移和破坏。下调mi R-103能够显著降低程序性细胞死亡蛋白10(PDCD10)的水平。将mi R-103mimic和p GL3-PDCD10 WT 3'-UTR共转染至A549细胞,我们检测到荧光素酶的活性显著下降,而在mi R-103 mimic和p GL3-PDCD10 mut 3'-UTR共转染的A549细胞中荧光素酶活性不变。过表达PDCD10可以显著逆转NSCLC组织和细胞中mi R-103介导的促凋亡作用。实验结果:在人的非小细胞肺癌组织细胞中,miRNA-103的低表达和PDCD10的高表达显著相关。PDCD10蛋白在非小细胞肺癌组织中表达升高。转染miRNA-103 mimics抑制PDCD10的表达。miRNA-103 mimics显著抑制含wt PDCD10-3'UTR的质粒的荧光素酶活性,却没有影响含mut PDCD10-3'UTR的质粒的荧光素酶活性,这说明miRNA-103直接结合并作用于PDCD10-3'UTR的相应预测靶位点。增强miRNA-103表达或siRNA介导的PDCD10基因沉默均能显著减弱肺癌细胞增殖和侵袭能力。实验结论:miRNA-103对PDCD10 m RNA翻译产物的作用的负调控的。增强miRNA-103表达或siRNA介导的PDCD10基因沉默均能显著减弱肺癌细胞增殖和侵袭能力。
【图文】：
图 1.miR-103 在 NSCLC 组织和细胞系中表达下调(A) qRT-PCR 检测肺癌组织和正常肺组织中 miR-103 mRNA 相对表达。(B)qRT-PCR 检测 NSCLC 源性细胞系和 16HBE 细胞中 miR-103 mRNA 相对表达(n= 3 独立实验)。(C) miR-103 表达水平与肺癌肿块大小相关。 (D) miR-103 表达
图 2.PDCD10 在 NSCLC 组织和细胞系中表达上调(A) A549 细胞中转染了 NC 或 miR-103 mimic 后 PDCD10 mRNA 和蛋白表达。(B) qRT-PCR 检测肿瘤组织和正常肺组织中 PDCD10 mRNA 相对表达量。(C) qRT-PCR 检测 NSCLC 源性细胞系和 16 HBE 细胞中 PDCD10 mRNA 相对表达量。 (D) PDCD10 表达水平与肿瘤大小相关。 (E) PDCD10 表达水平与肿瘤病理分期相关。(F)根据Pearson相关系数 miR-103与 PDCD10 呈负相关。(n = 3）独立实验。 误差线代表均数 ± 标准差. *P<0.05, 与对照组相比。3. miR-103 直接靶向调节 PDCD10我们使用 TargetScan (www.targetscan.org)软件进行 miR-103 靶基因预测，根据所得的预测结果从中选取 PDCD10 作为一个潜在的靶基因(图 3A)。为验证PDCD10 是否确实受到 miR-103 直接调节，将 PDCD10 基因的野生型 3'-UTR
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2
本文编号：2695216
【图文】：
图 1.miR-103 在 NSCLC 组织和细胞系中表达下调(A) qRT-PCR 检测肺癌组织和正常肺组织中 miR-103 mRNA 相对表达。(B)qRT-PCR 检测 NSCLC 源性细胞系和 16HBE 细胞中 miR-103 mRNA 相对表达(n= 3 独立实验)。(C) miR-103 表达水平与肺癌肿块大小相关。 (D) miR-103 表达
图 2.PDCD10 在 NSCLC 组织和细胞系中表达上调(A) A549 细胞中转染了 NC 或 miR-103 mimic 后 PDCD10 mRNA 和蛋白表达。(B) qRT-PCR 检测肿瘤组织和正常肺组织中 PDCD10 mRNA 相对表达量。(C) qRT-PCR 检测 NSCLC 源性细胞系和 16 HBE 细胞中 PDCD10 mRNA 相对表达量。 (D) PDCD10 表达水平与肿瘤大小相关。 (E) PDCD10 表达水平与肿瘤病理分期相关。(F)根据Pearson相关系数 miR-103与 PDCD10 呈负相关。(n = 3）独立实验。 误差线代表均数 ± 标准差. *P<0.05, 与对照组相比。3. miR-103 直接靶向调节 PDCD10我们使用 TargetScan (www.targetscan.org)软件进行 miR-103 靶基因预测，根据所得的预测结果从中选取 PDCD10 作为一个潜在的靶基因(图 3A)。为验证PDCD10 是否确实受到 miR-103 直接调节，将 PDCD10 基因的野生型 3'-UTR
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 Bo Liu;Jin-Ku Bao;Jin-Ming Yang;Yan Cheng;;Targeting autophagic pathways for cancer drug discovery[J];Chinese Journal of Cancer;2013年03期
，本文编号：2695216
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/2695216.html
