辛伐他汀对结肠癌HCT-116细胞的作用及机制初探

发布时间：2020-06-07 19:36

【摘要】：目的:观察辛伐他汀对结肠癌HCT-116细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并从分子水平探讨其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定8种他汀类药物对结肠癌细胞株HCT-116作用后增殖的情况,计算半抑浓度(IC50),筛选其中对HCT-116增殖抑制效果最好者并确定药物作用有效剂量;划痕实验、Transwell小室法检测所筛选出的他汀药物对HCT-116细胞0、24、48 h迁移与侵袭能力的影响;流式细胞术检测该药对HCT-116细胞的凋亡情况;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)检测药物处理后HCT-116中EMT相关基因E-cadherin、β-catenin、Twist的表达水平的变化情况;蛋白免疫印迹技术(WB)检测药物处理后HCT-116中EMT相关蛋白E-cadherin、β-catenin、Twist水平的变化。结果:MTT法结果显示辛伐他汀对HCT-116增殖的抑制作用最明显,故选用辛伐他汀进行后续实验;划痕实验及Transwell小室法结果发现辛伐他汀在选择的浓度下(4μM)均可以有效抑制HCT-116的侵袭和迁移;流式细胞术结果发现在辛伐他汀的作用下,可促进细胞的凋亡;q RT-PCR实验检测发现辛伐他汀作用HCT-116细胞后,随着辛伐他汀作用浓度的增高,E-cadherin m RNA上调、而β-catenin m RNA和Twist m RNA表达均下降,各实验组与阴性对照组对比差别具有统计学意义,并呈现浓度依赖性(P0.05);此外,WB结果显示辛伐他汀随着浓度的升高,E-cadherin上调,但β-catenin和Twist蛋白表达均降低,各实验组与阴性对照组对比差别具有统计学意义,并呈现浓度依赖性(P0.05)。结论:辛伐他汀可抑制体外培养的HCT-116细胞的增殖、侵袭和转移,并促进其凋亡;在转录及翻译水平下调E-cadherin的表达、上调β-catenin和Twist的表达可能是辛伐他汀抑制结肠癌HCT-116细胞侵袭和转移的机制之一。
【图文】：

辛伐他汀,细胞迁移,处理组,细胞侵袭

图 2 辛伐他汀对 HCT-116 细胞迁移能力抑制实验注：*表示与空白对照组相比 P<0.053.3 辛伐他汀对 HCT-116 细胞侵袭和迁移的影响通过比较未经处理的细胞的迁移侵袭率以及加药组的迁移侵袭率可以发现，下室细胞数量未经处理组要明显高于处理组，辛伐他汀在选择的浓度下（4μM）可以有效抑制 HCT-116 的迁移和侵袭（图 3，，P<0.05）。

辛伐他汀,细胞迁移,象限,凋亡

图 3 辛伐他汀对 HCT-116 细胞迁移与侵袭能力抑制实验注：*表示与空白对照组相比 P<0.05伐他汀对 HCT-116 细胞凋亡的影响照组的凋亡率为 9.76±2.05，实验组的凋亡率为 32.37±1.93（见图 4）。上角象限代表机械损伤的细胞，左下角代表正常细胞，右下角代表早期右上角代表晚期凋亡的细胞，右侧两个象限相加便得到了凋亡细胞的百示，加入辛伐他汀后，细胞凋亡率有明显的增加，并且有显著性差异，的确可以诱使细胞发生凋亡（P<0.05）。B40*)
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.35

【参考文献】