PKCε介导的谷氨酰胺酶磷酸化在非小细胞肺癌中的作用及机制研究

发布时间：2020-06-13 02:24

【摘要】：谷氨酰胺代谢在癌症发生发展过程中发挥了重要作用。作为谷氨酰胺代谢的第一个酶,谷氨酰胺酶被认为是一个重要的癌症治疗靶点,对于谷氨酰胺酶表达调控的研究也成为当前研究的热点。然而,目前对于谷氨酰胺酶翻译后修饰的研究相对较少。在本研究中,我们发现磷酸化修饰是调控谷氨酰胺酶功能至关重要的翻译后修饰,并且是癌细胞表现出谷氨酰胺酶高活性的主要原因。通过质谱技术与定点突变技术我们发现并鉴定出第314位丝氨酸的磷酸化是癌细胞中调控谷氨酰胺酶活性的关键磷酸化位点。进一步研究发现,在非小细胞肺癌中NF-κB-PKCε信号轴负责调控谷氨酰胺酶第314位丝氨酸的磷酸化。在非小细胞肺癌细胞中,我们通过CRISPR/Cas9技术将谷氨酰胺酶第314位丝氨酸突变为丙氨酸,然后研究该位点磷酸化对癌细胞功能的影响。突变的癌细胞在增殖能力、克隆集落形成能力及动物体内成瘤能力上都受到了显著的抑制。进一步的机制研究发现,在突变的癌细胞中,谷氨酰胺代谢受到了明显的抑制且基因的表达模式与细胞的代谢模式都发生了重排。此外,我们还发现谷氨酰胺酶第314位丝氨酸磷酸化水平与非小细胞肺癌病人的生存率呈负相关。综上所述,该研究解释了非小细胞肺癌细胞中谷氨酰胺酶呈现高活性的分子机制,为以谷氨酰胺酶为靶点开发新的抗肿瘤药物提供了坚实的理论基础。
【图文】：

图 2.1 非小细胞肺癌细胞的增殖依赖于谷氨酰胺A、非小细胞肺癌细胞（H1299, H292, SPC-A1,A549, H23）与正常人支气管上皮细胞（HBE）分别在正常培养基与谷氨酰胺缺失的培养基中培养 6 天。然后将细胞消化下来计数。＊＊＊P<0.001, ns: P>0.05。B、提取细胞中的总 RNA 逆转录为 cDNA，然后用特异性的 Q-PCR 引物检测谷氨酰胺酶各个亚型在细胞中的表达情况。＊＊＊P<0.001。2.4.2 抑制谷氨酰胺酶的功能影响非小细胞肺癌细胞的增殖

抑制谷氨酰胺酶功能影响非小细胞肺癌细胞的增殖A-F、在非小细胞肺癌细胞（H1299,H292,SPC-A1,A549,H23）与正常支气管上皮细胞（HBE）
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

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本文编号：2710488