姜黄素联合5-FU对MEC-1细胞凋亡及NF-κB、caspase-3表达的影响

发布时间：2020-06-13 17:52

【摘要】：目的:探讨姜黄素与5-FU联合使用对粘液表皮样癌MEC-1细胞的凋亡效应及NF-κB、caspase-3蛋白表达的影响。为姜黄素与5-FU联合使用对粘液表皮样癌的治疗上提供一定的理论依据。方法:实验组分为姜黄素组、5-FU组、联合组,对照组为含有0.1%DMSO的PBS组。将MEC-1细胞置于含10%胎牛血清及1%双抗的RPMI-1640培养液,37℃、5%CO_2培养箱中培养,并进行传代,待肿瘤细胞处于对数生长期时备用。(1)不同浓度姜黄素(0、20、40、60、80、120μmol//L)孵育MEC-1细胞不同时间(24、48、72h)后,用CCΚ-8检测细胞增殖抑制率。(2)同样,不同浓度5-FU(0、20、40、60、80、120μmol/L)孵育MEC-1细胞24h后,用CCΚ-8检测细胞增殖抑制率,通过实验结果计算出姜黄素、5-FU 24h的IC_(50)值用于后续各项实验。(3)姜黄素和5-FU单独及联合作用于粘液表皮样癌MEC-1细胞24h,CCΚ-8法检测肿瘤细胞体外增殖抑制情况。(4)加入不同浓度(20、40、60μmol/L)的姜黄素、5-FU、姜黄素+5-FU孵育MEC-1细胞,培养12、24h后用流式细胞仪进行凋亡的检测。(5)加入34.79μmol/L浓度的姜黄素和104.6μmol/L浓度的5-FU单独及联合作用于MEC-1细胞24h后,Western bolt测定NF-κB、caspase-3蛋白表达水平变化。结果:(1)不同的浓度作用下,实验组与对照组对MEC-1细胞增殖作用的比较,差异有统计学意义(F_(组间)=719.378,P_(组间)0.01)。随着作用时间增加,姜黄素对MEC-1的细胞增殖抑制作用增强(F_(时间)=203.286,P_(时间)0.01);姜黄素不同浓度组与时间存在交互效应(F_(交互)=12.650,P_(交互)0.01),即在不同时间点、不同浓度的姜黄素均对MEC-1细胞生长有抑制作用。(2)随着5-FU浓度升高,对MEC-1细胞的生长抑制作用增强。(3)联合用药组与34.79μmol/L姜黄素、联合用药组与104.6μmol/L 5-FU之间对MEC-1细胞增殖抑制作用的比较,差异具有统计学意义(P0.05),联合用药比单独用药对MEC-1细胞生长抑制作用更强。(4)各实验组药物均能诱导MEC-1细胞凋亡。随着浓度升高,各药物组诱导MEC-1细胞凋亡作用增强。联合用药组与姜黄素组之间、联合用药组与5-FU组之间对MEC-1细胞诱导凋亡作用比较,差异均具有统计学意义(均P0.05),联合用药组诱导MEC-1细胞凋亡作用更强。(5)姜黄素与5-FU均能下调NF-κB及上调caspase-3蛋白表达水平,联合用药组下调NF-κB,上调Caspase-3蛋白能力高于单独用药组(P0.05)。结论:(1)不同浓度的姜黄素、5-FU均能有效抑制MEC-1细胞的增殖和诱导MEC-1细胞的凋亡,联合用药比单独用药对MEC-1细胞生长抑制及诱导凋亡作用更强。(2)姜黄素与5-FU联合使用能够有效的抑制MEC-1细胞的增殖,促进MEC-1细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB活性,上调caspase-3表达有关。
【图文】：

图 1 不同浓度姜黄素作用于 MEC-1 细胞不同时间后的吸光度值（n=5）表 1 CCK-8 法测定各浓度组姜黄素作用 MEC-1 细胞不同时间后生长抑制率（ ±S,n=5,%姜黄素浓度（μmol/L）细胞生长抑制率24h 48h 72h0 2.85±0.650 3.15±0.671▲2.68±0.391C 20 25.553±7.887★39.770±4.081★▲43.79±4.13★C 40 58.978±1.494★ 82.965±1.852★ ▲88.48±3.08★ C 60 66.575±4.803★◆86.363±3.445★◆▲93.08±2.40★◆C 80 70.580±0.718★ 92.406±2.507★ ▲94.30±4.01★ C 120 84.392±1.868★ 93.729±2.451★ ▲95.52±2.70★ C 注：与同时刻的对照组比较，★p<0.01;与同时刻的 20μmol/L 浓度组对比， p<0.05；与同时刻的 40μmol/L 对比，◆p<0.05；与同时刻的 60μmol/L 浓度组对比， p>0.05；与同时刻的 80μmol/L 浓度组对比， p<0.05浓度的 24h 实验组对比，▲p<0.01；与同浓度的 24h 实验组对比，Cp<0.01；与同浓度的 48h 实验组对比， P

组存在显著差异（P<0.01），72h与48h组存在差异(P<0.05)，姜黄素在同 浓度下对MEC-1细胞的生长抑制作用随着作用时间的延长而增强。其中48h后, 各浓度组姜黄素对MEC-1细胞生长抑制作用速率减缓（见表1、图2）。姜黄素浓度与时间存在显著交互效应，，即在不同时间点、不同浓度的姜黄素均对MEC-1细胞生长均有抑制作用（F姜黄素浓度*时间=12.650，P<0.01）。（3）通过LSD-t检验得出，同 时间不同的药物浓度（0、20、40、60、80、120μmol/L）作用下，对照组与实验组对MEC-1细胞增殖抑制作用存在显著差异（P<0.01）。相同时间组内浓度两两比较，60μmol/L浓度组与80μmol/L浓度组对MEC-1细胞增殖抑制作用无差异（P<0.05），其余各组之间都存在差异（P<0.05）。在同 作用时间内药物浓度低于60μmol/L时，随着浓度升高，姜黄素对MEC-1细胞增殖抑制作用显著增强
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.8

【参考文献】

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本文编号：2711529