稳定过表达CD14胃腺癌SGC-7901细胞体系的构建

发布时间：2020-06-16 06:57

【摘要】：目的:构建能够使CD14稳定过表达的慢病毒载体。建立稳定过表达CD14的胃腺癌SGC-7901细胞系,探讨慢病毒载体转染SGC-7901细胞后CD14的mRNA及蛋白的表达变化,奠定研究胃癌发病机制的基础。方法:构建CD14过表达的慢病毒载体。分组:空白对照组(SGC-7901组)、阴性对照组(NC-LV组)、CD14过表达组(LV-CD14组),NC-LV组为用不含CD14的慢病毒载体转染SGC-7901细胞,LV-CD14组利用CD14过表达载体转染SGC-7901细胞,空白对照组不做任何处理。随后用Real-time PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达,探讨CD14过表达对总蛋白表达的影响。结果:成功构建过表达CD14的慢病毒载体。胃腺癌SGC-7901成功被过表达CD14的慢病毒载体转染,筛选出稳定过表达CD14的胃腺癌SGC-7901体系。LV-CD14组细胞CD14的mRNA相对表达水平是NC-LV组的4.32倍,是空白对照组的4.82倍,LV-CD14组相对表达水平与NC-LV组、空白对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。NC-LV组、SGC-7901组差异不明显(P0.05)。LV-CD14组的蛋白表达量为NC-LV组的1.700倍,为空白对照组的1.7419倍。稳定过表达CD14的细胞,mRNA和蛋白表达水平上都有升高,与NC-LV组、空白对照组相比,具有统计学意义(P0.05)。结论:胃癌SGC-7901细胞成功被CD14过表达慢病毒载体转染。本研究中,转染CD14过表达慢病毒载体后,CD14 mRNA和蛋白质在胃癌细胞中过度表达。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2
【图文】：

一、 CD14 过表达慢病毒载体的构建料和设备验材料表 1 主要材料 来源293T 细胞 中山大学实验中心细胞库毒表达载体（图 1） 上海吉凯基因化学技术有限公 BLUE MRF’感受态细胞 上海浩然生物技术有限公司毒阴性对照 上海吉凯基因化学技术有限公

图 3 酶切电泳图列：黑色加粗字体CGTCCTGCTTGTTACCACGCCAGAAGTCTGCAACTTCAGTGTGTGTCTGCCTAGAGCCGTTCAGTATGCTGACGTGGGAGCCGCCGTGTGCTAGCGTAAAGATAACCGGAPDH CD14

【参考文献】

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本文编号：2715703