与肺癌治疗及预后相关的新的生物标志物初探

发布时间：2020-06-16 11:42

【摘要】：背景:肺癌的免疫靶向治疗,如检查点抑制剂的应用,已经使肺癌治疗取得了里程碑式的进展。免疫检查点抑制剂的抗瘤机理并非直接靶向消灭肿瘤细胞,而是通过去除T细胞上的抑制性通路,使得肿瘤特异性活化的T细胞重具活力,从而促使这类细胞充分发挥抗肿瘤作用。免疫检查点抑制剂的治疗策略在肿瘤中治疗取得成功,也进一步证明了自然发生的肿瘤活化CD8+T细胞的存在,显示了其潜在的强大抗肿瘤能力,同时也使这一类细胞成为广泛研究的焦点。然而,目前为止,大多数对于肿瘤特异性活化T细胞的研究主要聚焦于肿瘤组织中,对这类细胞在循环血当中的研究非常有限。方法:采集83例肺癌患者及49例作为对照的健康人的外周血,将其外周血单个核细胞进行了八色流式分析,检测CD137、PD-1在外周血CD8~+T细胞中表达的比例。同时检测了CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞在外周血CD4~+T细胞中的比例。在肺癌组当中分析淋巴细胞与各项临床病理学特征之间的关系,并分析CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞与抗原活化CD8~+T细胞之间的相关性。同时采集另两例肺癌患者外周血进行CD8~+PD-1~+T细胞及CD8~+PD-1~-T细胞分选,对分选细胞进行RNA提取、反转录及TCR测序。结果:无论是治疗前还是在治疗过的肺癌患者中,外周血CD8~+T细胞当中PD-1~+T细胞以及CD137~+T细胞的比例均较健康人显著升高,肺癌患者外周血CD137、PD-1双阳的CD8~+T细胞也显著高于健康人群,在老年肺癌患者当中尤为显著。同时,肺癌组CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞的比例不仅高于健康人群,而且CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞在CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞所占比例与抗原活化CD8~+T细胞在CD8~+T细胞中的比例呈较显著的正相关。两例患者TCR测序结果中,一例(小细胞肺癌,T1N1M0)的CD8~+PD-1~+T淋巴细胞较CD8~+PD-1~-T细胞出现了克隆多样性降低和TCR克隆的集中。而另一例(腺癌,T1N0M0)则未检测到上述现象。结论:我们的结果有助于为临床上选择免疫治疗的优势治疗人群提供更多线索;同时,肿瘤特异性活化CD8~+T淋巴细胞和效应性调节性T细胞的比例同步升高现象支持靶向抑制调节性T细胞的同时联合激活肿瘤特异性活化T淋巴细胞如免疫检查点抑制剂或肿瘤疫苗等的联合治疗策略。背景:CD8+T细胞是抗肿瘤免疫的主要效应细胞之一,CD137和PD-1均在抗原诱导时表达增高,其中CD137分子被认为是T细胞活化的标志,并且可作为识别肿瘤抗原特异性活化CD8+T淋巴细胞的特异性标识。CD137免疫激动的联合治疗模式在早期抗肿瘤临床研究中显示出较好的疗效和前景。然而目前尚缺乏对于肺癌组织原位肿瘤微环境中CD137+肿瘤浸润淋巴细胞的了解以及与临床特征和预后的相关研究。方法:我们对118例肺腺癌患者临床资料进行搜集整理,对患者生存进行了随访,对肺癌患者的组织样本进行归集筛选、进行组织微阵列芯片的制作、免疫多标荧光染色,分析肿瘤组织原位的肿瘤免疫微环境中CD8、CD137、PD-1、及伽马干扰素、颗粒酶B的表达情况及其之间的关系,并进一步分析其与患者的临床特征以及预后的相关性。结果:CD137绝大多数并不与CD8共表达,CD8+CD137+淋巴细胞数量非常稀少。CD137+肿瘤浸润淋巴细胞相比CD8+PD-1+细胞显著高表达IFN-γ及颗粒酶B。而CD8+PD-1+淋巴细胞与相对应的CD8+PD-1-淋巴细胞表达IFN-γ及颗粒酶B的水平无显著差异。生存分析结果显示基质区CD8+T细胞比例高者较比例低者无论是在全组肺腺癌还是在EGFR敏感突变人群中均显示出较长的生存。基质区中淋巴细胞表达CD137、CD8、PD-1的比例与肺腺癌的性别、年龄、EGFR基因突变状态、以及肿瘤分化程度无显著关系,然而吸烟者较不吸烟者基质区CD8+TILs的比例更高(p=0.023),同时吸烟者较不吸烟者基质区CD137+淋巴细胞呈现比例更高的趋势(p=0.053)。结论:对晚期肺腺癌患者肿瘤微环境中CD137+肿瘤浸润淋巴细胞的原位分析有助于深入了解晚期肺腺癌肿瘤微环境CD137+淋巴细胞的特征,同时也为免疫治疗中选择具有治疗优势的目标患者人群提供了更多线索。背景:小细胞肺癌恶性度高,疾病发展迅速,常在较早期阶段出现血行转移。而目前为止小细胞肺癌的治疗尚无显著性进展。对该疾病的进一步深入探究非常迫切。对于小细胞肺癌治疗过程中基因亚克隆结构以及基因组演化的了解将有助于对该疾病发生发展深入了解。然而小细胞肺癌足够的肿瘤组织样本常难以获得,尤其是动态的肿瘤组织样本。作为一种具有早期出现远处转移特点的恶性肿瘤,通过循环血肿瘤DNA(ctDNA)测序来进行小细胞肺癌基因组分析将可能成为研究其相关基因构成及动态演变的潜在的有力手段。方法:在本研究中,我们对22例小细胞肺癌治疗前的ctDNA及配对的肿瘤组织DNA进行430个肿瘤基因的目标基因测序。同时还对部分小细胞肺癌患者在治疗的不同时期的血样进行了ctDNA动态检测分析,并分析其与临床特征及生存的相关性。结果:分析结果发现治疗前的小细胞肺癌ctDNA和配对的肿瘤组织DNA有相似的亚克隆结构。治疗前ctDNA克隆突变的平均等位基因突变频率(VAF)与患者的一线无进展生存时间以及总生存时间相关。对治疗前、后的ctDNA突变分析显示在治疗后的样本中出现了更多的与DNA修复和NOTCH信号通路有关的突变。结论:通过ctDNA测序这种检测体细胞突变的可靠手段,能够从较为独特和深入的视角有效描绘小细胞肺癌基因组景观、亚克隆构成和和治疗过程中的基因演变。为深层次了解小细胞肺癌提供了新的途径,也为小细胞肺癌预后提供了新的生物标记物选择。
【学位授予单位】：北京市结核病胸部肿瘤研究所
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2
【图文】：

过程图,流式,淋巴细胞,肺癌患者

图 1 图中所示分别为一例肺癌患者（上半图）和健康人（下半图）流式分选肿瘤活化 CD8+T淋巴细胞过程。分析前去除黏连细胞及死细胞；圈选 CD3+T 淋巴细胞；分别圈选 CD8+T 细胞、CD4+T 细胞的门并排除其余细胞；针对 CD8+T 淋巴细胞当中表达 CD137 阳性的、以及表达 PD-1阳性的分别圈门。

调节性T细胞,效应

图中所示为对于效应性调节性T细胞进行圈门

【相似文献】