EZH2相互作用蛋白在乳腺癌细胞中功能研究

发布时间：2020-06-20 06:19

【摘要】：目的:鉴定乳腺癌细胞中EZH2与Mnc2蛋白质相互作用,探讨EZH2及Mnc2基因在乳腺癌细胞中的功能和机制。方法:1.通过免疫共沉淀的实验方法以及Western Blot实验方法验证了EZH2与Mnc2的相互作用。2.分别利用脂质体转染及病毒感染的方法构建了过表达及沉默Mnc2细胞系。3.在诱导型沉默细胞模型中,利用Western Blot检测了Mnc2对组蛋白H3第二十七位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)的调控作用。4.在过表达及沉默Mnc2细胞模型中,通过细胞计数法研究Mnc2对乳腺癌细胞的增殖的影响。结果:免疫共沉淀实验表明Mnc2与EZH2存在相互作用。成功构建了过表达Mnc2细胞系MDA-MB231-Tenton-HAMnc2,利用抗HA抗体检测到HAMnc2高效表达,在过表达Mnc2细胞系中证明了Mnc2具有促进乳腺癌细胞增殖功能。构建了沉默Mnc2的细胞系T47D-shMnc2,在此细胞系中进一步验证了Mnc2促进细胞增殖功能。构建了强力霉素诱导型沉默Mnc2细胞系T47D-Tenton-shMnc2,在此细胞模型中检测到沉默Mnc2表达后可以升高细胞内组蛋白H3K27me3水平。结论:1.本研究验证确定了Mnc2蛋白为EZH2的相互作用蛋白。2.过表达Mnc2基因可以促进乳腺癌细胞增殖,并且沉默Mnc2基因可以抑制乳腺癌细胞增殖,证明Mnc2有调控乳腺癌细胞增殖的功能。3.Mnc2具有调控EZH2对H3K27三甲基化修饰的功能。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9
【图文】：

EZH2 相互作用鉴定-Mnc2 质粒的构建与鉴定期通过免疫共沉淀与质谱鉴定到 Mnc2（基因名称为潜在相互作用蛋白，为了研究 Mnc2 与 EZH2 相互作们利用 PCR 克隆的方法构建了 plv-HA-Mnc2 表达内过表达 Mnc2 与 HA 标签融合蛋白。经 PCR 验证、2、3、4 正确，单克隆菌落 5 为阴性，如图 1。随析，最后选取 2 号克隆质粒，进行后续实验。

图 2 . Western Blot 检测 HA-MNc2 在 MB231 细胞中的过表达。1 未诱导的 MDA-MB231-Teton-HAMnc2 细胞；2 加 DOX 诱导 5 天的MDA-MB231-Teton-HAMnc2 细胞。Figure 2 Over-expression of the plv-HA-MNc2 in MB231 cells.1 Anti-HA WB results of total protein of MDA-MB231-Teton-HAMnc2 cells without inducenti-HA WB results of total protein of MDA-MB231-Teton-HAMnc2 cells induced by Dox for 3 Mnc2 与 EZH2 相互作用的研究收集 MDA-MB231-Teton-HAMnc2 细胞，提取细胞核蛋白之后，A 抗体进行免疫共沉淀纯化 Mnc2 相互作用蛋白，同时设 IgG 抗体

【参考文献】

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1 郑莹;吴春晓;张敏璐;;乳腺癌在中国的流行状况和疾病特征[J];中国癌症杂志;2013年08期

2 胡峗宏;林晓燕;崔嵘嵘;王铮元;许诚;;EZH2蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义[J];现代医院;2013年07期

3 黄冰洋;潘晓燕;李质馨;王正朝;于永生;窦肇华;;Polycomb Group蛋白复合体与干细胞的发育调控[J];中国医学科学院学报;2012年03期

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本文编号：2722005