CCR9在浆细胞样树突状细胞介导的人胃癌免疫抑制微环境中的作用

发布时间：2020-06-22 12:11

【摘要】：目的:浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cell,PDC)在肿瘤免疫抑制微环境中起重要作用。目前,有研究发现趋化因子受体9(Chemokinereceptor 9,CCR9)是引导PDC向消化道归巢的重要分子,CCR9+PDC参与了消化道免疫耐受的形成。本实验的目的是探讨CCR9在PDC介导的人胃癌免疫抑制微环境中的作用。方法:应用免疫组化的方法检测了 140例患者的胃癌组织和正常非癌胃粘膜组织,比较调节T细胞(Regulatory T cell,Treg)以及PDC在两组之间是否存在差异。同时从140例标本中随机选取了 40例,通过免疫荧光法检测了胃癌组织和正常组织中CCR9+PDC的数量。采用Western Blot分析胃癌组织和正常组织中CCL-25的表达情况。应用流式细胞术检测30例肿瘤患者和30例健康体检者外周血中PDC及其亚群的数量和Treg细胞及其亚群的数量;ELISA检测他们血浆中白介素-2(Interleukin-2,IL-2),白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)等多种细胞因子水平。选取了 14例胃癌患者的转移与非转移淋巴结,检测PDC及其亚群的比例和Treg细胞及其亚群的比例。结果:1.胃癌患者肿瘤组织中的Treg细胞、PDC和CCR9+PDC的数量明显高于正常非癌胃粘膜。2.胃癌组织中的CCL-25的表达量显著上调。3.胃癌患者外周血中PDC、CCR9-TDC、Treg细胞、ICOS+Treg细胞、ICOS-Treg细胞较对照组增多。4.转移淋巴结中PDC、CCR9+PDC、Treg细胞、ICOS+Treg细胞较非转移组增多。5.与健康人相比,胃癌患者外周血中IL-2减少,IL-6增加,免疫抑制细胞因子IL-10明显增加。6.不同分期和淋巴结转移情况下分析后,PDC或Treg均无显著差异。结论:胃癌组织内调节T细胞增多,提示胃癌内存在着免疫抑制微环境;PDC可能依赖CCR9向胃癌组织归巢并发挥免疫负性调节作用。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2
【图文】：

并且其在部分肿瘤中的表徸量随着侵袭性的增加而增加［２Ｗ９１。逡逑利用新鲜标本，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ检测ＣＣＬ－２５的表达量，可见其胃癌组织内逡逑的表徶量明显增高（图２）。胃组织中ＣＣＬ２５的高表达是可能诱发肿瘤形成的原逡逑因之一。逡逑Ｔ逦Ｎ逡逑图２胃癌组织中ＣＣＬ－２５表运上调逡逑３．４邋胃癌患者外周血中邋ＰＤＣ、ＣＣＲ９－ＰＤＣ、Ｔｒｅｇ、ＩＣＯＳ＋Ｔｒｅｇ、１ＣＯＳ－逡逑Ｔｒｅｇ细胞数量增加逡逑首先，我们通过五色流式细胞术分析外周血中的ＰＤＣ反其亚群（图３ａ－ｂ）。用逡逑Ｌｉｎｅａｇｅ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１２３邋标记邋ＰＤＣ，主要通过邋ＣＤ１２３邋和邋ＣＤｌｌｃ邋来区分逡逑浆细胞样树突状细胞（ＰＤＣ）和髓样树突状细胞（ＭＤＣ）。胃癌患者外周血中ＰＤＣ、逡逑ＣＣＲ９＋ＰＤＣ、ＣＣＲ９＿ＰＤＣ比例（占Ｌｉｎｅａｇｅ—细胞）与健康对照组相比，分别为逡逑０．９０±０．６８％邋ｖｓ．邋０．５８±０．３２％，邋Ｐ＝邋０．０２４；邋０．０６±０．１１％邋ｖｓ．邋０．０２±０．０１°／0，邋Ｐ＝邋０．０６２；逡逑０．８６±０．７４％ｖｓ．邋０．５６士０．２７％，Ｐ＝０．０２４（图３ｃ）。胃癌患者中ＰＤＣ的数量较健康人有逡逑显著的增加，其中以ＣＣＲ９下ＤＣ增多为主。逡逑１７逡逑

（ａ）胃癌患者转移淋巴结中ＰＤＣ、ＣＣＲ９＋ＰＤＣ（占Ｌｉｎｅａｇｅ？细胞）比例较对照组逡逑大幅升高。（ｂ）胃癌患者转移淋巴结中Ｔｒｅｇ、ＩＣＯＳ＋Ｔｒｅｇ邋（占ＣＤ４＋Ｔ细胞）比例较逡逑对照组显著升高。逡逑３．６胃癌患者外周血中多种细胞因子水平的变化逡逑为了进一步分析胃癌患者和健康人的外周免疫微环境，我们通过ＥＬＩＳＡ试剂逡逑盒检测了邋３０例胃癌患者和３０例健康人血浆中的五种细胞因子水平，包括ＩＬ－２、逡逑ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＮＦ、ＴＧＦ－ｐ。通过统计分析发现，胃癌组血浆中ＩＬ－２较对照组逡逑［（６９．９２±５．１３）邋ｐｇ／ｍｌ邋ｖｓ．邋（７５．７２±１０．７）邋ｐｇ／ｍｌ，邋Ｐ＝０．０１０６）］明显下降。胃癌组血浆逡逑ＩＬ－１０，邋ＩＬ－６邋水平显著高于对照组，分别为（５．８丨士４．４１）邋ｐｇ／ｍｌｖｓ．邋（３．８士３．０５）ｐｇ／ｍＵ逡逑Ｐ＝０．０４５７；邋（７．０士４．７＞邋ｐｇ／ｍｌ邋ｖｓ＿（４＿４±２＿７）邋ｐｇ／ｍｌ邋，邋Ｐ＝０．０１１９。两组间邋ＴＮＦ、ＴＧＦ－ｐ邋的逡逑表达无明显差异［（９．４８士邋１．４）邋ｐｇ／ｍｌ邋ｖｓ．邋（１０．２６士３．７）邋ｐｇ／ｍｌ，邋Ｐ＝０．２８４３；邋（７３６６±３０２３）逡逑／ｍｌ邋ｖｓ．７１８８±２０７９／ｍｌ，邋Ｐ＝０．７９２４图邋５。逡逑

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本文编号：2725656