LARP7在肺癌细胞转移过程中的功能与机制研究

发布时间：2020-07-04 23:45

【摘要】：在全球排名前十的恶性肿瘤中,肺癌的发病率和死亡率都是最高的。而在我国肺癌的发病人数和死亡人数都高居全球第一位。已有的研究表明,LARP7在胃癌、乳腺癌、心肌肥大等疾病中有重要的功能。LARP7通过调控细胞中正性转录延伸因子P-TEFb和端粒酶等分子的活性,调节细胞中基因的转录等过程,从而在肿瘤的发生发展及恶化过程中发挥重要的作用。本课题主要以肺癌细胞A549及在此基础上建立的稳定敲除LARP7的细胞株为研究平台,采用了多种生物学常用的技术手段研究LARP7在肺癌的发生发展及恶化过程中的功能与机制,如Western blot,PCR,过表达质粒,基因编辑,质谱等。主要内容包括:(1)在肺癌细胞A549中过表达LARP7,结果显示LARP7过表达以后,降低了细胞的生长和增殖速度;划痕试验表明,细胞的的迁移能力被抑制,侵袭实验表明,细胞的侵袭能力被抑制,EMT的很多标志物也分别被上调和下调。(2)利用基因编辑技术CRISPR/Cas9对细胞A549中的基因LARP7进行了敲除,发现细胞变得狭长且突触状明显,这些变化也符合细胞运动和转移能力增强的特征;同时细胞的生长和增殖速度增强,同时迁移能力和侵袭能力也明显增强,EMT的很多标志物也分别被上调和下调。(3)另外研究了敲除LARP7以后细胞转录水平的变化,发现RNA聚合酶ⅡCTD的磷酸化水平增加,促进基因的转录延伸过程。另外蛋白质组学的结果表明,LARP7敲除后促进P-TEFb由复合物7SK snRNP中解离,被募集到超级转录延伸复合物SEC中,从而调控基因的表达。另外,结果显示细胞内的NF-κB减少、Akt的磷酸化增加、p53异常高表达等细胞因子变化明显,表明可能是通过NF-κB和Akt等信号通路调节细胞的转移性等特性的。综上所述,本课题的研究结果表明了 LARP7在肺癌细胞中是一个重要的抑癌因子,它通过调控基因的转录延伸过程和某些信号转导途径中的相关因子,导致肺癌细胞的转移。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2
【图文】：

肺癌,治愈率,死亡率,患者

高于全球癌症死亡率平均水平１７％，而且我国是世界上人口数量最多的国家，导逡逑致我国的发病人数和死亡人数位居全球第一。在恶性肿瘤发病率和死亡率的排名逡逑前十的榜单中，如图１．１所示，肺癌的发病率和死亡率都高举首位，其中在肺癌逡逑患者中男性的发病状况更为严重，而且随着年龄的增长，中国男女的发病率和死逡逑亡率皆呈现逐渐升高的态势［１］。肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，后者又包逡逑括肺淲癌、肺腺癌、肺腺鳞癌等［１］。肺癌ｌｂ期患者的治愈率在４０％左右，ｌａ逡逑期患者的治愈率则有６０％左右，ＩＩ期的治愈率小于３０％，ＩＩＩ期或ＩＶ期患者基本逡逑不能治愈，平均生存期一般为几个月。肺癌成为恶性肿瘤之首，宄其原因，主要逡逑有以下几点：一、个人生活习惯和饮食方式的不合理化和不健康化，食品的健康逡逑１逡逑

聚合酶,结构模式

通常组成ＲＮＡ聚合酶的亚基也更大更多。ＲＮＡ聚合酶Ｉ主要位于细胞核逡逑的核仁，负责转录ｒＲＮＡ；邋ＲＮＡ聚合酶ＩＩ是由１２个大小不同的亚基蛋白质组成，逡逑如图１．２所示，它的分子量约为５５０邋ｋＤａ，主要存在于细胞核的核质中，被研究逡逑得最多，负责转录所有的ｍＲＮＡ和大部分的核内小ＲＮＡ；邋ＲＮＡ聚合酶ＩＩＩ主要位逡逑于细胞核的核质内，负责转录ｔＲＮＡ、少部分的ｒＲＮＡ和以及其它的微小ＲＮＡ。逡逑近些年来，人们发明和创造出了很多种研究可溶性非细胞体系的方法，来进一步逡逑研究ＲＮＡ聚合酶（包括ＲＮＡ聚合酶Ｉ、ＩＩ和ＩＩＩ）调控的更准确的基因转录过逡逑程。这些体系提供了更加重要的在ＤＮＡ水平和蛋白质水平上研宄真核生物基因逡逑转录机理的方法，这些方法用不同盐离子浓度的缓冲液抽提了细胞核内的不同组逡逑分，根据实验目的的不同，分离得到了许多和基因的启动子区结合的转录因子［２］。逡逑４逡逑

【参考文献】