重组病毒杀伤及巨胞饮实验研究

发布时间：2020-07-07 00:04

【摘要】：近年来,病毒载体凭借其利用病毒传送基因组进入其他细胞,从而进行感染的分子机制,被广泛应用于基因治疗和疫苗的开发中。因此围绕病毒载体的优化与改造已成为相关治疗手段研发的重点。其中,病毒的重组构建技术及其内化入胞能力是其进一步开发成为病毒载体的两个关键研究方向。目前,胰腺癌已被列为十大恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在逐年递增,但对其的治疗方法及效果还尚无有效的措施来应对,因此常常被称作“癌中之王”。随着对癌症的深入研究,基因治疗和细胞治疗已成为有效的新型疗法。因此,本研究重组构建了腺病毒和痘病毒,并分别对其胰腺癌抑制能力和毒力进行了评价;然后结合两种病毒的自身尺寸大小及细胞内吞方式,对两种病毒的内化入胞能力进行分析,探讨了两种病毒进一步开发成为病毒载体的潜力。第一,腺病毒作为一种溶瘤病毒具有一定的抑制肿瘤生长的能力,且其可作为病毒载体来携带其他外源基因产生进行进一步的杀伤肿瘤的效应。第二,痘病毒并不具备直接杀伤肿瘤的作用,但可作为病毒载体携带其他外源基因来杀伤肿瘤。第三,病毒入胞的模式由其颗粒大小、受体的选择、宿主细胞趋向性以及传播模式等决定。通常腺病毒的粒径为70-90nm,而痘病毒较大,直径可达300nm,研究病毒内吞机制,其大小是一个重要指标。但由于病毒其种属偏好、高侵染性等特点,目前难以使用病毒进行广泛地实验。本研究选用了一种尺寸灵活且可控、高度均一、强内化能力的纳米材料——介孔二氧化硅(MSNs)作为病毒内吞研究的替代物,合成出不同尺寸的MSNs,并使用透射电镜进行尺寸验证,然后分别考察了不同尺寸(其尺寸大小依次为接近腺病毒的53nm、接近痘病毒的300nm和420nm)介孔二氧化硅的入胞情况,以确定肿瘤细胞巨胞饮能够内化物质的尺寸范围。由此初步推断,腺病毒能通过网格蛋白介导内吞及巨胞饮等多种方式内吞进入细胞,而痘病毒仅能通过巨胞饮的方式入胞。综上,本研究发现重组腺病毒对胰腺癌具有较好的抑制作用;重组痘苗病毒在缺失两段基因片段后,对细胞的毒力具有了显著的下降,在细胞中病毒扩散水平显著降低;腺病毒能通过网格蛋白介导内吞及巨胞饮等多种方式内吞进入细胞,而痘病毒仅能通过巨胞饮的方式入胞。本研究的结果为腺病毒和痘病毒作为病毒载体的进一步开发提供了重要的实验数据支撑和设计参考。同时,本研究使用纳米材料代替病毒做巨胞饮的研究,加深了对胰腺癌细胞内吞大物质机制的理解,也更好地了解病毒进入胰腺癌细胞的过程,避免了使用病毒进行实验的局限性,从而令杀伤效果较好的病毒载体的研究更加具有效率。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.9
【图文】：

30图 2.1 重组腺病毒质粒构建图2.2.2 实验试剂与仪器设备DMEM 培养基购自美国 HyClone 公司；青霉素/链霉素双抗购自美国 HyClone 公司；0.25%胰酶购自美国 HyClone 公司；胎牛血清（FBS）购自美国 HyClone 公司；腺病毒大量纯化试剂盒购自美国 Biomiga 公司；MTS 购自美国 Roche 公司；AO/EB 和DAPI 染料购自美国 Life 公司；恒温 CO2 培养箱购自日本松下公司；水平离心机购自上海安亭公司；超净工作台购自北京东联公司；低温高速离心机购自德国 Eppendorf 公司；荧光显微镜源自日本

24 h10 MOI 5.7±2.5 5.2±2.1 5.8±2.4 6.1±4.2100 MOI 6.2±3.7 6.5±3.4 6.6±3.1 6.1±2.748 h1 MOI 9.8±4.2 6.1±3.2 7.1±3.2 6.1±3.110 MOI 13.4±4.2 10.5±4.4 9.2±3.4 8.9±4.8100 MOI 20.3±3.2 16.5±5.6 12.7±2.8 8.5±4.272 h1 MOI 15.1±4.9 12.3±1.6 10.2±4.1 7.2±3.610 MOI 23.5±3.1 19.1±1.2 19.3±2.3 9.2±3.1100 MOI 40.7±3.7 35.5±3.4 31.6±2.6 9.7±2.396 h1 MOI 15.3±4.3 17.5±4.8 10.8±4.6 4.8±1.110 MOI 30.9±3.3 27.2±3.5 16.3±6.7 9.9±4.7100 MOI 45.6±3.3 39.1±2.1 15.2±3.9 6.2±3.4

图 2.3 48h 重组腺病毒对人胰腺癌细胞 MIA-PaCa-2 存活率的影响图 2.4 72h 重组腺病毒对人胰腺癌细胞 MIA-PaCa-2 存活率的影响

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘琴;李佩玲;刘梅梅;;胞饮突的相关研究进展[J];中国优生与遗传杂志;2012年01期

2 王煜;陈秀娟;王丽岩;;极具潜力的子宫内膜容受性形态学标志——胞饮突的研究进展[J];现代生物医学进展;2009年01期

3 王煜;陈秀娟;王丽岩;;极具潜力的子宫内膜容受性形态学标志——胞饮突的研究进展[J];现代生物医学进展;2009年04期

4 肖帆;黄筱金;;胞饮突与雌、孕激素[J];实用临床医学;2007年02期

5 黄冬梅;黄光英;张明敏;;排卵后单次剂量米非司酮对小鼠着床窗期子宫内膜表面胞饮突表达的影响[J];中国医院药学杂志;2007年10期

6 李嘉;张勤华;齐聪;;胞饮突与子宫内膜容受性的关系及其表达调控机制研究进展[J];山东医药;2014年18期

7 王瑶;冯云;;胞饮突——极具价值的种植窗预测工具[J];国外医学(计划生育/生殖健康分册);2006年02期

8 张扬;石少权;丘彦;;子宫内膜胞饮突的形成与雌孕激素及其受体的关系[J];中国冶金工业医学杂志;2010年01期

9 李权;谭晓珊;陈家仙;王丽;李艳;;A、C型子宫内膜种植窗期胞饮突的形态学观察[J];山东医药;2008年17期

10 魏丽坤;张雷;王蔼明;商微;李敏;李迎军;冀立娟;;PCOS患者植入窗期子宫内膜胞饮突的表达变化[J];山东医药;2009年26期

相关会议论文 前3条

1 郭艺红;乔玉环;孙莹璞;;白血病抑制因子和胞饮突在小鼠围植入期子宫内膜的表达[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

2 韩世充;孙世琪;郭慧琛;;口蹄疫病毒利用巨胞饮途径入侵宿主细胞的机制[A];中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集[C];2016年

3 黄冬梅;黄光英;张明敏;吴云霞;陆付耳;;补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响[A];全国中西医结合生殖健康学术研讨会论文及摘要集[C];2004年

相关重要报纸文章 前1条

1 蒋娟　本报记者 周维辉;只为50户高山同胞饮清泉[N];六盘水日报;2010年

相关博士学位论文 前7条

1 金P;重组病毒杀伤及巨胞饮实验研究[D];吉林大学;2018年

2 郭艺红;白血病抑制因子、胞饮突与子宫内膜容受性关系的实验研究[D];郑州大学;2006年

3 张彪;KRAS突变胰腺癌细胞表面巨胞饮结构的表征以及介孔二氧化硅抗肿瘤药物载体入胞特征的研究[D];吉林大学;2016年

4 杜s

本文编号：2744336