CPSF4通过调控COX-2表达参与肺癌发生发展的功能与分子机制研究

发布时间：2020-07-17 12:10

【摘要】：目的阐明CPSF4(剪切和多聚腺苷酸化特异性因子4)在肺癌中是否对催化花生四烯酸转换成前列腺素的重要限速酶环氧合酶2具有调控作用。如有调控作用,在一定程度上阐明其具体调控机制。阐明此二种基因对于临床患者肿瘤分期,肿瘤演进,大体生存率是否具有临床病理相关性。在体内实验中进一步证实通过体外实验以及临床病例所得到的实验结论。方法选定两类肺癌细胞系,H1299和H460,用慢病毒转染H1299使其稳定高表达CPSF4,用脂质体混合质粒转染H460使其瞬时高表达CPSF4。用脂质体混合CPSF4小干扰RNA特异性敲低CPSF4表达,用蛋白质免疫印迹检测在蛋白水平过表达以及敲低CPSF4后细胞环氧合酶2蛋白水平的表达变化。用DNA免疫印迹检测在RNA水平过表达以及敲低CPSF4后细胞环氧合酶2 RNA水平的表达变化。用划痕实验检测过表达或敲低CPSF4后细胞迁移能力的变化。用体外细胞侵袭实验实验检测过表达胞增殖能力的变化。用荧光活性实验检测过表达或敲低CPSF4后细胞环氧合酶启动子活性的变化。用蛋白质免疫印迹实验检测过表达或敲低CPSF4后细胞核转录因子κB通路上重要指标蛋白核内核外蛋白水平表达量的变化。用激光共聚焦实验检测过表达或敲低CPSF4后细胞核转录因子κB通路上重要指标蛋白核内核外蛋白水平表达量的变化。用CHIP和Pulldown实验检测过表达CPSF4后细胞核内细胞核转录因子κB通路活化蛋白及CPSF4本身与环氧合酶2启动子区域DNA结合量的变化。用IP实验检测肺肿瘤细胞中CPSF4与细胞核转录因子κB通路活化蛋白是否存在结合。用激光共聚焦实验实验检测肺肿瘤细胞细胞核中CPSF4与细胞核转录因子κB通路活化蛋白是否存在结合。购买临床患者组织芯片标本,用统计学的方法检测CPSF4与环氧合酶2在临床患者中表达是否具有相关性。用统计学的方法检测CPSF4与环氧合酶2在临床患者中表达与若干临床指标是否具有相关性。用免疫组织化学实验检测CPSF4与环氧合酶2在临床患者组织标本中蛋白水平表达是否具有相关性。用裸鼠成瘤实验检测过表达或敲低CPSF4后肿瘤体积、重量的变化。结果在肺癌细胞系H1299和H460中,1.CPSF4与环氧合酶2在细胞蛋白水平的表达存在正相关性。2.CPSF4与环氧合酶2在细胞RNA水平的表达存在正相关性。3.CPSF4的表达与细胞的迁移能力存在正相关性。4.CPSF4的表达与细胞的侵袭能力存在正相关性。5.CPSF4的表达与细胞的增殖能力存在正相关性。6.CPSF4的表达与细胞环氧合酶2启动子活性存在正相关性。7.CPSF4的表达与细胞核转录因子κB通路的活性具有正相关性。8.CPSF4的表达与细胞核内细胞核转录因子κB通路活化蛋白及CPSF4本身与环氧合酶2启动子区域DNA结合量具有正相关性。9.在肺肿瘤细胞中存在CPSF4与细胞核转录因子κB通路活化蛋白结合。在临床患者组织芯片标本中10.CPSF4与环氧合酶2的表达具有相关性。11.CPSF4与环氧合酶2的共同表达与临床分期具有正相关性12.CPSF4与环氧合酶2的共同表达与患者存活率具有负相关性。在裸鼠体内试验中13.CPSF4和环氧合酶2的表达同时与肿瘤体积及重量存在正相关性。结论在肺癌细胞中,1.过表达(敲低)CPSF4的表达使环氧合酶2的表达增加(降低)。2.CPSF4通过两条完全不同的途径正向调控环氧合酶2的表达,其一为间接途径通过影响细胞核转录因子κB通路的活性从而影响环氧合酶2的表达。3.其二为直接结合环氧合酶2启动子从而影响环氧合酶2的表达。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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