“深层海水”与热疗联合治疗胃癌的实验性研究

发布时间：2020-07-22 07:45

【摘要】：[目的]研究生理性深层海水(PDSW)联合热疗对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞株、裸鼠皮下SGC-7901移植瘤中相关基因及蛋白表达的影响,为PDSW与热疗联合治疗胃癌提供理论基础。[方法]第一部分:研究探讨PDSW联合热疗的体外抗癌作用及其机制。在体外培养的胃癌SGC-7901细胞株被随机分为三组:空白组、生理盐水组和PDSW组;空白组的培养基不做任何处理,PDSW组在培养基中加入PDSW,生理盐水组则加入等量的生理盐水,24小时后,每天分别置于培养箱中,在37℃(持续培养)、40℃热疗6h及43℃热疗1h,在37℃复温后0d、1d、2d、3d,分别绘制胃癌细胞生长曲线,进行MTT检测,并检测细胞克隆形成率和细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR分析检测各样品细胞中的PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21 和 P16 基因的表达,Western Blot 检测各组样品细胞中 PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21 和 P16 蛋白表达。第二部分:研究PDSW联合热疗对SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用机制。选择4-5周龄的健康裸鼠50只,雌雄各半,将SGC-7901细胞注射至裸鼠皮下,建立SGC-7901人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型;待移植瘤直径长至1cm时,将裸鼠随机分成5组,每组10只,雌雄各半,分别进行H20+RT、H2O+40℃、H2O+43℃、PDSW+40℃、PDSW+43℃处理,绘制裸鼠肿瘤生长曲线,观察裸鼠肿瘤组织切片。并提取组织中的RNA,采用实时荧光定量PCR检测各裸鼠肿瘤组织中 PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和P16基因的表达,Western Blot检测各组裸鼠肿瘤组织中PTEN、NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin、Vimentin、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和P16蛋白表达。[结果]第一部分:PDSW联合热疗对人胃癌SGC-7901细胞抗癌机制的研究结果表明,在37℃常规培养条件下,PDSW能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,当PDSW联合热疗对人胃癌SGC-7901细胞进行处理后,其增殖能力受到更明显的抑制。与之相似,对细胞凋亡也出现类似的影响。PDSW联合热疗能使SGC-7901细胞中PTEN、Caspase-3、抑癌基因p53、p21和p16基因和蛋白的上调表达,而抑制 Ki67、COX-2、Bcl-2、NF-κB、survivin 以及 vimentin 基因和蛋白的表达,进而抑制胃癌细胞增殖。基于以上结果,初步断定PDSW联合热疗可以有效地抑制SGC-7901细胞增殖并且促进它的凋亡。第二部分:PDSW联合热疗对体内肿瘤抑制作用的影响研究结果表明,在37℃常规培养条件下,PDSW能抑制裸鼠移植瘤的增殖,当与热疗联合时,抑制作用显著增强,与第一部分的结果相似,用PDSW联合热疗处理患有胃癌移植瘤的裸鼠,其癌组织中 NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin 和 Vimentin 蛋白表达明显受抑,而PTEN、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和P16蛋白的表达明显上调,通过调控促凋亡基因及凋亡抑制基因,从而有效抑制胃癌细胞的增殖。基于以上结果得出,PDSW联合热疗能有效抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞的凋亡,最终杀死肿瘤细胞,使胃癌得到治疗。[结论]无论是体外培养的人胃癌SGC-7901细胞株,还是裸鼠中的SGC-7901移植瘤,在常规条件下,PDSW能导致SGC-7901细胞增殖受抑,当与热疗联合进行处理后,对SGC-7901细胞增殖的抑制效果更为显著。热疗联合PDSW能激活胃癌 SGC-7901 细胞和移植瘤组织中 PTEN、E-cadherin、Caspase-3、P53、P21和 P16 蛋白的上调表达,而抑制 NF-κB、COX-2、Ki67、Bcl-2、survivin 和 Vimentin基因和蛋白的表达。综上所述,PDSW联合热疗能有效抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞的凋亡,最终杀死肿瘤细胞,使胃癌得到治疗。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2
【图文】：

形成情况,细胞克隆,克隆率,高温抑制

特别是在４３°Ｃ的ＰＤＳＷ组抑制最为明显。不同处逡逑理条件下ＳＧＣ－７９０１细胞克隆形成情况（图１．２）及形成率（图１．３），空白组、对逡逑照组和实验组的克隆率均随温度的升高而降低，说明高温抑制细胞的克隆形成，逡逑并且在４０°Ｃ和４３°Ｃ下，ＰＤＳＷ组的克隆率显著低于空白组和对照组，由此可见，逡逑ＰＤＳＷ可能通过抑制ＳＧＣ－７９０１细胞活性，影响细胞克隆的形成。逡逑ｃｏｋ逦逦邋ｍｍ逡逑ＩＶ逡逑二．餐入逡逑？一逦；逡逑Ａ邋（４0ｘ）逡逑ＣＯＮ逦ＮＣ逦ＰＤＳＷ逡逑Ｂ邋（２０0ｘ）逡逑图１．２

形成率,细胞克隆,处理条件,深染

４．细胞爬片ＨＥ染色结果逡逑光学显微镜下，ＳＧＣ－７９０１细胞呈长梭形，表现为核紫浆红，核大深染。并逡逑且在不同温度的处理条件下，细胞形态变化无明显差异（图１．４）。逡逑ＣＯＮ逦ＮＣ逦ＰＤＳＷ逡逑＾邋ＩｌｌｌＪＩ逡逑Ａ邋（１０0ｘ）逡逑３６逡逑

热疗,细胞凋亡,人胃癌细胞,理条

Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｔｈｅ邋ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆ邋ＳＧＣ－７９０１邋ｃｅｌｌｓ邋ｃｌｉｍｂｉｎｇ邋ｐｉｅｃｅ逡逑５．流式细胞分析结果逡逑ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ检测ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡的结果（图１．５，邋１．６），流式细胞检测结逡逑果表明，三个组ＳＧＣ－７９０１细胞的凋亡均随温度的升高而上升，且在三个温度处逡逑理条件下，同正常组相比，ＰＤＳＷ组细胞凋亡明显增加，在４（ＴＣ和４３°Ｃ下呈显逡逑著性差异。说明热疗能加快ＳＧＣ－７９０１细胞的凋亡，且在ＰＤＳＷ联合热疗的条件逡逑下，ＰＤＳＷ更能促进人胃癌细胞的凋亡。逡逑３７逡逑

【参考文献】