PRFA对外周静脉CTCs的影响及CLM患者门静脉CTCs表型的临床意义

发布时间：2020-07-27 21:02

【摘要】：研究背景及目的:肝脏恶性肿瘤包括原发性肝癌和继发性肝癌(转移性肝癌),其中原发性肝癌是全球死亡率最高的癌症之一,尤其在中国,原发性肝癌年发病人数占全球一半左右。此外,由于肝动脉和门静脉双重血供,以及局部特殊的微环境等因素,肝脏是恶性肿瘤最常见的转移部位。经皮射频消融(percutaneous radiofrequency ablation,PRFA)将射频微波转换成热能,导致靶组织脱水,最终使靶组织细胞发生凝固性坏死。PRFA已经成为针对原发性肝癌或转移性肝癌常用的治疗手段。循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)来源于原发实体肿瘤,由于诊断、治疗操作或肿瘤细胞自发脱落进入外周静脉,具有转移潜能。CTCs与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)血行转移之间存在很高的相关性,代表CRC患者的不良预后。目前,PRFA对CTCs的影响方面的相关研究较少。有报道称,跟手术组患者相比,PRFA被发现会导致外周循环中CTCs数量升高。然而,此类报道的患者样本量较小,且没有对CTCs表型的变化及其他相关因素进行探究。此外,毛细血管直径在5～10微米之间,肿瘤细胞直径可达20微米。逻辑上讲,由于毛细血管的拦截作用,CTCs可被毛细血管拦截。探究门静脉及外周静脉中CTCs数量和表型的区别,能帮我们更好的了解毛细血管对CTCs的拦截功能,及门静脉中不同表型CTCs的临床意义。因此,本研究分为两个章节。第一章的研究目的为深入探究在原发性肝癌或转移性肝癌患者中行PRFA对CTCs数量和表型的影响;第二章旨在研究结直肠癌肝转移(colorectal cancer liver metastases,CLM)患者的门静脉中不同CTCs表型的临床意义。研究方法:在第一章中,我们对43例患者行PRFA治疗。PRFA前30分钟和3天后分别采集外周静脉血检测CTCs数量和表型,我们还同时采集全部患者的血常规和肝功能指标,及部分患者的免疫细胞亚群和肿瘤标志物,并结合患者的一般情况、肿瘤背景、PRFA操作因素及治疗史进行分析。在第二章中,我们收集了 21例CLM患者的外周静脉和门静脉血检测CTCs数量和表型,并结合患者多种临床数据进行综合统计分析。研究结果:第一章的主要结果:(1)PRFA后第三天的CTCs总数升高,特别是间质型CTCs;(2)射频点数和CTCs数量改变之间存在部分相关性;(3)PRFA后第三天的淋巴细胞计数要比PRFA前显著降低,且淋巴细胞减少患者的CTCs增加程度更显著。第二章的主要结果:(1)门静脉和外周静脉中CTCs数量无明显差异,但门静脉中上皮型CTCs数量比外周静脉中多;(2)门静脉上皮型CTCs数量与患者肝转移结节数量有关;(3)CEA升高和淋巴细胞偏低的CLM患者的门静脉上皮型CTCs比例升高。研究结论:1、PRFA可使CTCs总数和间质型CTCs水平显著升高;2、射频点数和CTCs数量改变之间存在部分相关性;3、PRFA可使淋巴细胞总数降低,且淋巴细胞数量与CTCs增多程度有关;4、门静脉和外周静脉中CTCs总数无显著差异,但门静脉中上皮型CTCs数量比外周静脉中显著增多;5、门静脉上皮型CTCs与快速进展的CLM有关。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：

照片,表型,荧光显微镜,照片

逡逑ＰＲＦＡ后第三天的ＣＴＣｓ总数量呈显著升高（ｐ邋＝邋０．００９）（图３－２Ｅ）。除了邋ＣＴＣｓ逡逑的总数量以外，我们还分析了邋ＰＲＦＡ后第三天不同表型ＣＴＣｓ数量的变化。我们逡逑发现在ＣＴＣｓ总数（三种表型的ＣＴＣｓ）的升高中，以间质型ＣＴＣｓ的数量升高逡逑最为明显（ｐ邋＝邋０．００６）（图３－２Ｆ）。这些结果表明，肝脏肿瘤ＰＲＦＡ后第三天，逡逑ＣＴＣｓ总数，尤其是间质型ＣＴＣｓ的数量较ＰＲＦＡ前３０分钟显著升高。逡逑图３－１荧光显微镜下三种不同表型ＣＴＣｓ的照片逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｐｈｏｔｏｓ邋ｏｆ邋ｔｈｒｅｅ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ邋ＣＴＣｓ邋ｕｎｄｅｒ邋ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ逡逑（Ａ）图是有红色荧光信号的上皮型ＣＴＣｓ。（Ｂ）图是有红色和绿色荧光信逡逑号的混合型ＣＴＣｓ。（Ｃ）图是有绿色荧光信号的间质型ＣＴＣｓ。逡逑（Ａ）邋ｉｎｄｉｃａｔｅｓ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ邋ＣＴＣｓ邋ｗｉｔｈ

操作因素,总数

逡逑肝右叶）（图３－３Ａ至图３－３Ｅ）。我们用耙肿瘤的最长径的总和来反映耙肿瘤负荷。逡逑除了邋ｔ检验以外，我们还对ＰＲＦＡ因素和ＣＴＣｓ总数量的改变进行了双变量相关逡逑分析来探究是否上述ＰＲＦＡ因素会影响ＣＴＣ水平。尤其是治疗时间和射频点数，逡逑我们认为这两个ＰＲＦＡ因素可能与ＣＴＣｓ总数量的改变存在相关性，然而，在上逡逑述全部ＰＲＦＡ因素与ＣＴＣｓ总数量改变之间却却未发现显著强相关性（表３－４）。逡逑但值得一提的是，射频点数和ＣＴＣｓ总数量的改变之间存在部分正相关性逡逑（Ｓｐｅａｒｍａｎ邋ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ邋ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ邋＝邋０．３０３，邋ｐ邋＝邋０．０４８）。尽管相关系数并不令人满逡逑意，但是这种部分相关的结果暗示着ＣＴＣｓ总数量的升高可能和射频点数的增多逡逑之间存在相关关系，这种可能性值得后续相关大样本量研宄进一步追踪和分析。逡逑１５逡逑

外周静脉,门静脉

收集外周静脉血标本和门静脉血标本。先从每位患者的外周静脉（肘正中静脉）逡逑中收集外周血标本，随后在超声引导下行经皮肝门静脉穿刺术来收集门静脉血逡逑标本，最后取肝转移瘤活检标本。图３－１Ａ和图３－１Ｂ分别展示了经皮门静脉穿逡逑刺的超声图像和简化示意图。对２１例ＣＬＭ患者外周静脉和门静脉中的ＣＴＣｓ逡逑进行计数，我们发现在患者的外周静脉中，１８例患者（８５．７％）有２１个ＣＴＣ，逡逑１３例患者（６１．９％）有２邋３个ＣＴＣｓ，１０例患者（４７．６％）有２邋５个ＣＴＣｓ；在患者逡逑的门静脉中，２０例患者（９５．２％）有２邋１个ＣＴＣ，邋１４例患者（６６．７％）有２邋３个ＣＴＣｓ，逡逑１１例患者（５２．４％）有２邋５个ＣＴＣｓ。外周静脉中ＣＴＣｓ的平均数量及标准差为逡逑５．６７邋±邋１．１５个，门静脉中ＣＴＣｓ的平均数量及标准差是６．７６邋士邋１．３６个，独立样本逡逑ｔ检验分析发现二者无统计学差异（ｐ邋＝邋０．２５６，图３－１Ｃ）。此外，以患者临床病理逡逑参数［包括原发肿瘤位置、转移灶分布情况、原发灶切除情况、组织学分化程度、逡逑Ｋ－ＲＡＳ状态、肝转移灶数量、肝转移结节的最长径、肿瘤标志物（ＣＥＡ、ＣＡ１９９），逡逑血细胞分析（淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞／淋巴细胞比例ＮＬＲ和血小板计逡逑数）］为基础的亚组分析显示，各个亚组中的ＣＬＭ患者外周静脉和门静脉中的逡逑ＣＴＣｓ总数量均未发现显著差异。逡逑３６逡逑

【参考文献】