Pim3蛋白与雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡的相关性研究

发布时间：2020-07-29 16:33

【摘要】：背景胰腺癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一,由于早期诊断困难,大部分患者确诊时已属于中晚期。由于胰腺癌对现有化疗药物的耐药性问题,目前尚无显著改善患者生存状况的治疗药物。雷公藤甲素具有抗肿瘤活性,作用机制复杂,胰腺癌细胞内存在大量TPL诱导其凋亡的作用靶点。目的研究雷公藤甲素诱导胰腺癌Bxpc-3细胞凋亡与Pim3蛋白的相关性,分析其在雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡中的作用机制。方法MTT法检测雷公藤甲素对胰腺癌Bxpc-3细胞的增殖抑制效果;Annexin V-FITC/PI流式细胞术分析各实验组细胞凋亡比例的差别;Western Blot法检测胰腺癌Bxpc-3细胞中蛋白Pim-3、EST-1及pBad(s112)表达量的变化,用相对定量法分析比较各蛋白表达水平的差异。结果MTT检测细胞增殖抑制率结果显示:分别给予不同浓度(6.25nM/L-400nM/L)雷公藤甲素处理24h、48h、72h后,相比于无处理对照组细胞,各实验组均出现明显的细胞增殖抑制作用,(F=40.52,p0.05;F=245.2,p0.05;F=500.3,p0.05),且生长抑制率与时间呈正相关。给予不同浓度(12.5、25和50nM/L)雷公藤甲素处理48h后各实验组的生长抑制率与浓度呈正相关,分别为38.16±1.86%(12.50 nM/L)、47.20±0.95%(25 nM/L)、63.86±1.30%(50 nM/L)(组与组间多重比较,F=1451,p0.05);倒置荧光显微镜观察结果显示:相比于对照组,实验组胰腺癌Bxpc-3细胞随着雷公藤甲素浓度增加,细胞密度降低,凋亡增加。Annexin V-FITC、PI双染法检测细胞凋亡结果显示:经不同浓度(12.50nM/L,25 nM/L,50 nM/L)雷公藤甲素处理48h后胰腺癌Bxpc-3细胞凋亡比例增加,分别为10.78±0.80%、30.15±1.37%、48.65±2.57%(F=602.6,p0.05)。Western blot结果显示:相比于无处理对照组,各实验组Ets-1,Pim-3,pBad(s112)蛋白相对表达量在雷公藤甲素诱导胰腺癌Bxpc-2细胞中的表达降低,且随着雷公藤甲素浓度增加(0-50nM/L)其表达水平与之呈负相关。结论1.雷公藤甲素对人胰腺癌Bxpc-3细胞具有增殖抑制作用和凋亡诱导作用;2.雷公藤甲素可抑制人胰腺癌细胞Bxpc-3中Pim-3蛋白的表达;3雷公藤甲素可以通过Ets-1调控Pim-3表达,从而降低磷酸化Bad蛋白表达发挥凋亡诱导作用。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.9
【图文】：

荧光显微镜观察,生长状况,凋亡,雷公藤甲素

腺癌 Bxpc-3 细胞具有明显的增殖抑制、凋亡诱导作用（图2）。图 2：倒置荧光显微镜观察胰腺癌细胞 Bxpc-3 生长状况Control TPL 12.5nM/LTPL 25nM/L TPL 50nM/L3 雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞 Bxpc-3 凋亡流式细胞仪检测结果显示 TPL 对 Bxpc-3 细胞具有明显的诱导凋亡作用（图 3）。经 TPL 处理 48h 后，加药 12.5、25、50 组凋亡比例分别为 10.78±0.80%、30.15±1.37%、48.65±2.57%( F=602.6，p<0.05)，并在一定加药浓度范围（12.5~50nM/L）随着 TPL 剂量的增加，凋亡数量亦明显增加（各组间 p<0.01）

雷公藤甲素,胰癌,蛋白,蛋白质电泳

图 3：雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡4 蛋白质电泳检测目的蛋白表达情况Western Blot 方法检测各组中 Pim-3、pBad(s112)蛋白相对表达水平。检测结果显实验组 Pim-3、pBad(s112)蛋白在胰癌细胞 BxPC-3 的相对表达量低于对照组细胞（p<0.01）

【参考文献】