二甲双胍对人结肠癌HT29细胞抑制作用的机制探讨

发布时间：2020-08-04 10:57

【摘要】：目的探究二甲双胍对人结肠癌HT29细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及可能机制,以为临床对结肠癌的治疗增添新的实验数据。方法体外培养人结肠癌细胞株HT29,随机分两组。实验组二甲双胍干预浓度分5、10、20、40 mmol/L四个梯度,对照组加入相应量PBS液,干预24h,48h,72h分别用MTT法检测细胞增殖情况。对照组加入相应量PBS液,实验组的二甲双胍干预浓度为5、40 mmol/L,做划痕实验,48h后测量迁移距离。对照组加入相应量PBS液,实验组二甲双胍干预浓度为5、40mmol/L,做transwell侵袭实验,48h后测各组穿过的细胞数目。另一transwell侵袭实验,二甲双胍浓度40mmol/L干预人结肠癌细胞HT29,分别干预24h、48h、72h后测各组穿过的细胞数目。实验组HT29细胞用浓度5,10,20,40mmol/L二甲双胍干预24h后,光镜观察形态学改变。5,10,20,40mmol/L二甲双胍干预HT29细胞48h后,Annerxin VFITC和PI染色后用流式细胞术检测分析凋亡情况。实验组二甲双胍干预浓度为低浓度(5mmol/L)、高浓度(40mmol/L),对照组加入相应量PBS液,干预48h,Western Blot实验(蛋白质印迹法)通过检测蛋白PI3K、AKT、P-AKT(磷酸化AKT)、GSK-3β、P-GSK-3β(磷酸化GSK-3β)蛋白的表达。结果二甲双胍可以抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性,各组之间的抑制率差异有统计学意义(P均0.05)。划痕实验表明,40mmol/L二甲双胍加药组在24h、48h平均的迁移距离明显减小(P均0.05)。transwell侵袭实验体现出40mmol/L二甲双胍加药组在24h、48h平均的侵袭癌细胞数目明显减少(均P0.05)。光镜下可见人结肠癌HT29数目减少,且细胞由多边形变为圆形、体积缩小、核固缩、细胞核溶解等凋亡现象,且随着二甲双胍浓度增高细胞凋亡比例升高。流式实验结果示干预48h的实验组凋亡率大于阴性对照组(P0.05)。Western Blot实验检测结果示二甲双胍可以抑制HT29细胞PI3K、PAKT、P-GSK-3β蛋白表达量,对AKT、GSK-3β蛋白表达量无明显影响。低浓度组较对照组、高浓度组较低浓度组PI3K、P-AKT、P-GSK-3β蛋白表达量差异有统计学差异(P0.05),且呈浓度依赖性。结论1本实验说明了二甲双胍可以明显抑制结肠癌细胞增殖,且呈浓度-时间效应关系。且二甲双胍对人结肠癌HT29细胞具有抑制迁移、侵袭及促进凋亡的作用。2二甲双胍对结肠癌细胞以上几种生物学行为的影响机制可能与抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路的PI3K、PAKT、P-GSK-3β蛋白表达有关。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.35
【图文】：

蛋白印迹,二甲双胍

P＜0.05；与 5 mmol/L 二甲双胍处理组比较较，c：P＜0.05；与 20mmol/L 二甲双胍处 17 二甲双胍对 HT29 细胞凋亡的影响7 Effect of metformin on apoptosis of HT29 ce细胞相关蛋白表达的影响rn Blot 结果示：实验组的 AKT、GSK05，图 18、图 19），而二甲双胍终浓-AKT、P-GSK-3β 蛋白表达量较对照组二甲双胍终浓度 40 mmol/L 干预的高达量较低浓度组明显减少，说明二甲T、P-GSK-3β 蛋白的表达，呈浓度依赖

【参考文献】