PAK4结合并调控Abi3影响HCC细胞侵袭转移
发布时间：2020-08-05 16:43
【摘要】：背景:肝细胞癌(HCC)是全球第二大癌症死亡原因。全球每年约有100万例肝癌病例,为了提高肝癌患者的生存率,研究控制转移的基因以及识别新的预后标志物和治疗靶点十分重要。Abi3(也被称为NESH)是Abi家族三个成员,具有Src同源3(SH3)结构域,脯氨酸富集区(PR),无催化区域,作为一种信号蛋白,目前的研究表明Abi3很可能是抑制细胞运动和转移的抑制因子。p21激活激酶(PAK)家族作为小GTPase Cdc42和Rac的下游效应器,在细胞骨架重组、生存、运动性和肿瘤发生中起关键作用,PAK4与癌症的进展和转移密切相关,可能成为癌症的预测标志物和治疗靶点。本研究以HCC作为Abi3的研究模型,阐明由PAK4介导的Abi3在HCC增殖、迁移和侵袭中的潜在作用和下游通路。我们的研究结果表明,Abi3在HCC进展中发挥作用,是一个潜在的有用的分子预后标志物和治疗靶点。目的:研究Abi3在HCC中的作用;研究PAK4与Abi3间的作用方式;研究PAK4与Abi3间的调控对HCC侵袭转移的影响。方法:选取合适的HCC细胞株稳定下调Abi3,利用细胞功能实验研究Abi3丢失对HCC的影响。利用免疫共沉淀反应,确定Abi3与PAK4的相互作用,根据Abi3的结构域构建Abi3的不同截短载体,利用免疫共沉淀确定二者相互作用的区域。确定PAK4对Abi3的调节作用,选取合适的HCC细胞株稳定上调Abi3,检测上调Abi3对Abi3的作用,以及对细胞HCC细胞株侵袭转移的影响。结果:稳定下调Hep3B细胞中的Abi3能够增加细胞的增值能力,促进细胞非锚定依赖生长,增加细胞迁移及侵袭能力。Abi3的SH3结构域与PAK4能够以非激酶依赖的方式相互作用。PAK4能够抑制Abi3的表达,并且这种作用与PAK4的激酶活性相关。过表达Abi3能够减缓HCC细胞株迁移和侵袭的过程,而PAK4能够翻转这种作用。结论:在HCC细胞株中Abi3丢失能够促进肿瘤增殖、迁移与侵袭。PAK4通过非激酶依赖的方式与Abi3的SH3结构域结合,下调Abi3的表达,促进HCC的迁移与侵袭。
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7;R730.43
【图文】：
１．３．１琼脂糖凝胶电泳验证Ｂｇ邋ＩＩＩ和Ｈｉｎｄ邋ＩＥ酶切ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ载体逡逑ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ载体经Ｂｇ邋１ＩＩ和Ｈｉｎｄ邋ＨＩ酶切后，用琼脂糖凝胶电泳验证酶切逡逑产物，结果显示ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ载体被切割成线性化载体，如图１－３：逡逑ｐＳＵＰＥＲ．邋ｒｅｌｒｏ－ｖｅｔｏｒ逦ｍａｒｋｅｒ逡逑＿逡逑图１－３琼脂糖凝胶电泳显示ｐＳＵＰＥＲ．ｒｅｔｒｏ载体被切割成线性化载体逡逑１．３．２插入片段Ａｂｉ３邋ｓｈＲＮＡ的复性与测序逡逑本部分课题从ＮＣＢＩ中g粒猓椋郴虻娜ず塑账嵝蛄校ǎ危停撸埃保叮矗玻福襄义细癜凑丈鲜觯螅椋遥危辽杓圃颍茫粒恚猓椋铮罟镜模遥危粮扇旁谙呱杓迫砑杓棋义希粒猓椋郴蛱匾煨缘模保梗睿艄押塑账嵝蛄校拢蹋粒樱苑治鑫尥质粑镏滞葱孕蝈义狭校跣远哉眨ǎ危澹纾幔簦椋觯邋澹茫铮睿簦颍铮欤┪被沸蛄校⒕拢蹋粒樱苑治鑫尥质粑镏皱义贤葱孕蛄械募罨蛄校⒃谏杓频模螅瑁遥危亮蕉朔直鸺由希拢珏澹桑桑珊停龋椋睿溴澹桑桑擅盖绣义希玻跺义
本文编号：2781759
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
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【图文】：
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