高脂血症胃癌患者血清PGE2和VEGF水平、组织VEGF表达及其与肿瘤临床病理特征的关系
发布时间：2020-08-07 23:03
【摘要】：目的:检测胃癌合并高脂血症患者与不合并高脂血症患者相比,其血清前列腺素E2表达、血清血管内皮生长因子表达、胃癌组织血管内皮生长因子表达的差异。分析胃癌组织血管内皮生长因子表达与肿瘤临床病理特征的关系。探讨高脂血症对胃癌浸润和转移的影响。方法:收集天津医科大学总医院2014年3月至2015年1月手术切除的102例胃癌患者的临床病理资料进行分析,根据患者血脂实验室检测结果将其分为胃癌合并高脂血症组和不合并高脂血症组,分别应用酶联免疫吸附测定法及免疫组织化学染色SABC法测定前列腺素E2和血管内皮生长因子在血清和肿瘤组织中的表达,应用t检验及χ2检验判断其表达差异,分析胃癌组织VEGF表达与临床病理结果的相关性。结果:1 102例胃癌患者中合并高脂血症者占48.01%(49/102)。2高脂血症组与不合并高脂血症组在性别(c2=0.000,P=0.994)、年龄(χ2=0.019,P=0.890)、肿瘤位置(χ2=2.812,P=0.094)及肿瘤长径(c2=1.282,P=0.257)的差别上不具有统计学意义(P0.05);在肿瘤组织分化程度(c2=28.632,P=0.000)、浸润深度(c2=20.951,P=0.000)、淋巴结转移个数(c2=20.667,P=0.000)及TNM分期(c2=13.994,P=0.000)的差别上具有统计学意义(P≤0.05)3高脂血症组患者血清前列腺素E2表达量为28.268±4.250pg/ml,不合并高脂血症组血清前列腺素E2表达量为20.436±3.694pg/ml,高脂血症组明显高于不合并高脂血症组,两者差异具有统计学意义(t=9.952,P=0.000)。4高脂血症组患者血清血管内皮生长因子表达量为274.436±19.417pg/ml,不合并高脂血症组血清血管内皮生长因子表达量为206.290±22.779pg/ml,高脂血症组明显高于不合并高脂血症组,两者差异具有统计学意义(t=16.195,P=0.000)。5高脂血症组患者肿瘤组织血管内皮生长因子高表达者占75.51%,不合并高脂血症组肿瘤组织血管内皮生长因子高表达者占28.30%,高脂血症组明显高于不合并高脂血症组,两者差异具有统计学意义(χ2=22.706,P=0.000)。6血脂水平与血清PGE2水平存在正相关性,血清PGE2与血清VEGF水平存在正相关性(r=0.62,P=0.000),血清PGE2水平与胃癌组织VEGF表达存在正相关性(t=3.441,P=0.001),血清PGE2水平与胃癌组织VEGF表达存在正相关性(t=4.266,P=0.000)。7血清VEGF水平及胃癌组织VEGF的表达强度均与患者的性别、年龄、肿瘤位置及肿瘤长径的大小无显著相关性(P0.05),与分化程度、浸润深度、淋巴结转移个数及TNM分期有显著相关性。结论:1胃癌合并高脂血症患者较不合并高脂血症患者,外周血清PGE2、VEGF及肿瘤组织VEGF表达升高。2外周血清及胃癌组织VEGF高表达可加速肿瘤浸润及转移过程。3血清PGE2表达与血清及胃癌组织VEGF表达呈正相关,间接影响肿瘤地浸润及转移。4胃癌合并高脂血症患者可能通过影响PGE2、VEGF的表达增加促进肿瘤的浸润及转移风险。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【图文】：
IIA 期 T1N2M0、T2N1M0、T3N0M0IIB 期 T1N3M0、T2N2M0、T3N1M0、T4aN0M0IIIA 期 T2N3M0、T3N2M0、T4aN1M0IIIB 期 T3N3M0、T4aN2M0、T4bN0M0、T4bN1M0IIIC 期 T4aN3M0、T4bN2M0、T4bN3M0IV 期 任何 T 任何 NM11.2 实验方法及步骤1.2.1 酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清 PGE2 含量1.2.1.1 实验原理本实验采用竞争法检测特定抗原：预先将持异性抗体吸附于固相载体；入待测抗原和一定量的酶标已知抗原，使两者与固相抗体竞争性结合；通过涤分离，结合于固相载体的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。见下图 1：
2) 从密封真空包装袋中取出酶标板，计算需要孔数目，余者放回酶标板包装袋中以免底物失活。3) 设一空白对照孔。不加任何液体；每个标准品浓度孔各设两孔，每孔加入相应标准品 50ul；其余每个检测孔直接加待测标本 50ul。4) 除空白对照孔外每孔加入酶结合物 50ul，再按同样的顺序加入抗体 50ul，充分混匀，贴上不干胶封孔，置 37℃温箱温育 1 小时。5) 手工洗板，弃去孔内液体。洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复 3 次，拍干。6) 每孔加显色剂 A 液 50ul，显色剂 B 液 50ul，震荡混匀后，37℃避光显色 15分钟，每孔加终止液 50ul。7) 用酶标仪在 450nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。在终止反应 10分钟内进行检测。8) 应用“Curve Expert 1.3”软件进行分析，制作标准曲线，得到回归方程，将样本的 OD 值代入方程，计算出样本浓度。见下图 2：
图 3 ELISA 双抗体夹心法示意图1.2.2.2 实验准备1.2.2.2.1 基本物品准备蒸馏水、滤纸、加样器、EP 管、吸头等，塑料用品高压灭菌后 70℃烤干配制 0.01M PBS（PH7.2-7.6）作为洗涤液。1.2.2.2.2 配制人 VEGF 标准品由于试剂盒内标准品为冻干粉，需自行应用标准品稀释液将标准品稀释至同浓度。1) 配制 10,000pg/ml 标准品：取 1ml 样品稀释液加入标准品管内，盖好后静10 分钟以上，然后反复颠倒搓动以确保标准品冻干粉充分溶解。2) 配制 1000pg/ml 标准品：取 0.1ml 10000pg/ml 的标准品加入有 0.9ml 样品释液的 EP 管中，摇匀，做上标记。3) 配制 500pg/ml→15.6pg/ml 标准品：准备 6 只 EP 管，每管加 0.5ml 样品稀液，分别标记上 500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml15.6pg/ml。取 0.5ml 1000pg/ml 的标准品加入标记 500pg/ml 的管中，混匀
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【图文】：
IIA 期 T1N2M0、T2N1M0、T3N0M0IIB 期 T1N3M0、T2N2M0、T3N1M0、T4aN0M0IIIA 期 T2N3M0、T3N2M0、T4aN1M0IIIB 期 T3N3M0、T4aN2M0、T4bN0M0、T4bN1M0IIIC 期 T4aN3M0、T4bN2M0、T4bN3M0IV 期 任何 T 任何 NM11.2 实验方法及步骤1.2.1 酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清 PGE2 含量1.2.1.1 实验原理本实验采用竞争法检测特定抗原：预先将持异性抗体吸附于固相载体；入待测抗原和一定量的酶标已知抗原，使两者与固相抗体竞争性结合；通过涤分离，结合于固相载体的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。见下图 1：
2) 从密封真空包装袋中取出酶标板，计算需要孔数目，余者放回酶标板包装袋中以免底物失活。3) 设一空白对照孔。不加任何液体；每个标准品浓度孔各设两孔，每孔加入相应标准品 50ul；其余每个检测孔直接加待测标本 50ul。4) 除空白对照孔外每孔加入酶结合物 50ul，再按同样的顺序加入抗体 50ul，充分混匀，贴上不干胶封孔，置 37℃温箱温育 1 小时。5) 手工洗板，弃去孔内液体。洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复 3 次，拍干。6) 每孔加显色剂 A 液 50ul，显色剂 B 液 50ul，震荡混匀后，37℃避光显色 15分钟，每孔加终止液 50ul。7) 用酶标仪在 450nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。在终止反应 10分钟内进行检测。8) 应用“Curve Expert 1.3”软件进行分析，制作标准曲线，得到回归方程，将样本的 OD 值代入方程，计算出样本浓度。见下图 2：
图 3 ELISA 双抗体夹心法示意图1.2.2.2 实验准备1.2.2.2.1 基本物品准备蒸馏水、滤纸、加样器、EP 管、吸头等，塑料用品高压灭菌后 70℃烤干配制 0.01M PBS（PH7.2-7.6）作为洗涤液。1.2.2.2.2 配制人 VEGF 标准品由于试剂盒内标准品为冻干粉，需自行应用标准品稀释液将标准品稀释至同浓度。1) 配制 10,000pg/ml 标准品：取 1ml 样品稀释液加入标准品管内，盖好后静10 分钟以上，然后反复颠倒搓动以确保标准品冻干粉充分溶解。2) 配制 1000pg/ml 标准品：取 0.1ml 10000pg/ml 的标准品加入有 0.9ml 样品释液的 EP 管中，摇匀，做上标记。3) 配制 500pg/ml→15.6pg/ml 标准品：准备 6 只 EP 管，每管加 0.5ml 样品稀液，分别标记上 500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml15.6pg/ml。取 0.5ml 1000pg/ml 的标准品加入标记 500pg/ml 的管中，混匀
【参考文献】
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本文编号：2784642
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