达沙替尼与ATRA协同诱导ATRA耐药的APL细胞分化

发布时间：2020-08-09 06:07

【摘要】：全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)耐药是急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)治疗中的一大难题。本研究发现,达沙替尼(dasatinib)可协同ATRA诱导ATRA耐药的APL细胞系NB4-R1和NB4-R2分化。两药联合可活化RAF-1、MEK和ERK,并增强ATRA对PU.1、C/EBPβ和C/EBPε蛋白的上调作用。MEK特异性抑制剂U0126和RAF-1特异性抑制剂sorafenib tosylate均可阻断两药联合诱导的细胞分化、ERK活化以及C/EBPs和PU.1蛋白水平的上调。此外,sorafenib tosylate尚可抑制MEK活化。然而,两药联合并不增强RAF-1经典的上游分子——Ras活性。Ras的特异性阻断剂不抑制两药联合诱导的细胞分化和MEK活化。由此证实,两药联合通过Ras非依赖的RAF-1/MEK/ERK,调控C/EBPs和PU.1的蛋白水平,诱导细胞分化。鉴于Src家族激酶(Src family kinase,SFK)和粒细胞分化呈负相关以及dasatinib可抑制SFK,我们进一步研究SFK抑制和RAF-1活化的关系,以明确RAF-1的上游分子。研究证实,在RAF-1活化前3小时,dasatinib即可抑制NB4-R1和NB4-R2细胞系中主要活化的SFK—Lyn的活性,并伴随RAF-1的抑制性位点丝氨酸259(S259)的去磷酸化。另一种SFK抑制剂——PP2不仅抑制Lyn,还可模拟dasatinib,即它和ATRA联合可诱导细胞分化并使RAF-1 S259去磷酸化。由此说明,通过抑制Lyn,可去除RAF-1 S259的磷酸化,启动RAF-1活化,最终诱导细胞分化。综上所述,dasatinib和ATRA联合通过抑制Lyn,使RAF-1 S259去磷酸化,激活RAF-1/MEK/ERK,调控C/EBPs和PU.1的蛋白水平,最终诱导细胞分化。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R733.71
【图文】：

的作用浓度均为ｌｕｍｏｌ／１。为了观察剂量依赖效应，我们在ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２细胞中另设了逡逑较低剂量的达沙替尼组，分别为0．５ｕｍｏｌ／ｌ和ｌｕｍｏｌ／１。由于ＡＴＲＡ和达沙替尼均以ＤＭＳＯ配逡逑置，故对照组即用相座剂量的ＤＭＳＯ作为溶剂对照。如图１、２所示，与对照组相比，ＡＴＲＡ逡逑单药或不同剂量的达沙替尼单独作用可轻度抑制ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２细胞增殖；与达沙替尼逡逑或ＡＴＲＡ单独处理相比，达沙替尼与ＡＴＲＡ联合应用可明显抑制ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２细胞增逡逑殖，且呈时间和剂量依赖的效应。以上处理均不影响ＮＢ４－Ｒ１和ＮＢ４－Ｒ２的细胞活力。逡逑■Ｉ邋４０ｉ邋＋邋９ＭＳ。逦１００－ｌ逦＿逡逑0邋＋邋ＲＡ逦一逦？逦１逦？邋１邋１逡逑５．邋３０－邋＾邋0－５Ｄ逦Ｊ逦＾８０＇邋－邋ＤＭＳＯ逡逑ＮＢ４－Ｒ１邋？逦２０－逦＾邋０．５Ｄ＋Ｒ逦＝邋６0＇逦Ｚ逦0邋５Ｄ逡逑１逦＾邋１Ｄ＋Ｒ逦－ｇ邋４０－逦＾逦１0逡逑＝１０－逦｜邋00逦－逦０．５Ｄ＋Ｒ逡逑＝一＞邋２０－邋＋邋１Ｄ＋Ｒ逡逑Ｏ邋°０逦１逦２逦３逦４逦５邋ｄａｙｓ邋°0逦１逦２逦３逦４逦５邋ｄａｙｓ逡逑图１邋达沙替尼（Ｄ）和／或ＡＴＲＡ（ＲＡ）对ＮＢ４－Ｒ１细胞增殖和活力的影响逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄａｓａｔｉｎｉｂ（Ｄ）邋ａｎｄ／ｏｒ邋ＡＴＲＡ（ＲＡ）邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｖｉａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋ＮＢ４－逡逑Ｒ１邋ｃｅｌｌｓ逡逑１３逡逑

ＮＢ４－Ｒ１的细胞周期分布，而ｌｕｍｏｌ／ｌ、２ｕｍｏｌ／ｌ的达沙替尼对ＮＢ４－Ｒ２细胞有轻度Ｇ０／Ｇ１阻滞逡逑作用；与达沙替尼单药相比，达沙替尼与ＡＴＲＡ的联合对两种细胞均有明显的Ｇ０／Ｇ１阻滞作逡逑用，且呈剂量依赖效应（图３、图４）。逡逑ＤＭＳＯ逦０．５Ｄ逦１Ｄ逡逑Ｇ０＿／Ｇ１：４１．１４％邋丨逦Ｇ０／Ｇ１：３７．１２％邋丨逦Ｇ０／Ｇ１：４０．４８％逡逑８－逦ｊ邋Ｓ：４０．０３％逦ｊ邋Ｓ：４５．０８％逦Ｉ；邋５：４２．２９％逡逑｜Ｇ２／Ｍ：１８．８３％邋ｔ逦ｉＧ２／Ｍ：１７．７９％邋ｓ－逦｜Ｇ２／Ｍ：１７．２３％逡逑－ｉ：邋Ｉ邋Ｉ－邋［逦１＾逦１逡逑＂，，逡逑■ｆｃ邋－Ｔ－ＪＪ邋Ｊ邋－ＴＪ邋Ｍ逦！？：？邋？邋Ｋ逦ｔｆｊ＊邋１Ｂ逦？Ｊ邋＊邋？逦１？＾逦？邋▲邋ｉ．逡逑ＪＮｍ－Ｋｌ邋＾逦Ｇ０／Ｇ１：３４．９４％邋ｄ逦Ｇ０／Ｇｌ：４５．０６％邋丨逦Ｇ０／Ｇ１：６１．１１％逡逑ｊＳ：４１．１８％逦Ｓ：３７．０７％邋ｌｉ逦Ｓ：２６Ｊ６％逡逑ｉ－逦｜Ｇ２／Ｍ：２３．８８％逦ｉＧ２／Ｍ：１７．８７％邋＾逦Ｉｇ２／Ｍ：１１１３％逡逑１邋，邋＾邋＾逡逑丨．．…ｙ邋＇＇－＂ｉ＂邋＂Ｆ邋？＇ｉ＇■邋■邋ｒ邋■邋？逦１＂邋＂ｒ邋１邋＇ｒ逦（Ｊ逡逑ＰＩ逡逑图３邋达沙替尼（Ｄ）和／或ＡＴＲＡ（ＲＡ）对ＮＢ４＿Ｒ１细胞周期的影响逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄａｓａｔｉｎｉｂ（Ｄ）邋ａｎｄ／ｏｒ邋ＡＴＲＡ（ＲＡ）邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｃｅｌｌ邋ｃｙｃｌｅ邋ｏｆ邋ＮＢ４－Ｒ１邋ｃｅｌｌｓ逡逑１４逡逑

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本文编号：2786722