ING3过表达对乳腺癌细胞生物学特性影响

发布时间：2020-08-20 20:57

【摘要】：[目的]生长抑制因子1～5(Inhibitor of Growth1～5),即ING基因家族1～5。是多种肿瘤的抑制基因。通过多种机制参与了肿瘤细胞的生长、增殖、DNA修复、侵袭、迁移和凋亡等不同阶段的生物学过程。ING3作为家族基因里结构最特殊的一员,尚未报道在乳腺癌中的相关研究。本实验拟通过重组慢病毒侵染乳腺癌细胞株MCF-7和HCC1937,通过RT-PCR和Western Blot验证其转染效率,通过划痕、侵袭、迁移实验。探讨生长抑制因子3的表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响。是否如ING3在多种肿瘤中一样起到抑制作用,为临床治疗乳腺癌提供新的基因靶点和思路。[方法]1、分别以10%的FBS混合DMEF-12和RPMI,培养乳腺癌细胞株MCF-7和 HCC1937。2、以ING3为作用靶点合成LV5-ING3和LV5-NC并进行慢病毒滴度检测。3、以LV5-ING3侵染乳腺癌细胞株MCF-7、HCC1937,同时以LV5-NC侵染对应细胞株作为阴性对照。4、72h时即完成荧光蛋白表达,并在荧光显微镜下观察慢病毒和乱序病毒的侵染效率。5、RT-PCR 验证 LV5-ING3 侵染后的 MCF-7 和 HCC1937 的 ING3 表达。6、通过Western Blot检测侵染ING3后的MCF-7和HCC1937中ING3蛋白的表达。7、通过细胞划痕实验来对比过表达ING3的乳腺癌细胞MCF-7、HCC1937与阴性对照细胞迁移能力的影响。8、通过侵袭和迁移实验来对比过表达ING3的乳腺癌细胞MCF-7、HCC1937与阴性对照细胞的迁移及侵袭能力的影响。[结果]1、RT-PCR监测显示LV5-ING3能提高乳腺癌细胞株MCF-7和HCC1937中ING3的表达水平(p0.05)2、Western Blotting结果显示经LV5-ING3侵染乳腺癌细胞株MCF-7和HCC1937后,ING3蛋白表达增加(p0.05)3、细胞划痕实验结果表明:经LV5-ING3侵染的MCF-7和HCC1937的细胞迁移速度明显减慢(P0.05)。4、细胞侵袭和迁移实验表明:经LV5-ING3侵染的MCF-7和HCC1937的侵袭和迁移能力明显下降(p0.05)。[结论]1、过表达ING3可明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7、HCC1937的迁移和侵袭的能力。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9
【图文】：

过表达,内参,检测分析,琼脂糖凝胶

ＨＣＣ１９３７邋ＭＣＦ－７逡逑ＮＣ邋ＩＮＧ３邋ＮＣ邋ＩＮＧ３逡逑ＩＮＧ３逡逑ｐ－ａｃｔｉｎ逡逑结果显示经ＬＶ５－ＩＮＧ３过表达的ＨＣＣ１９３７和ＭＣＦ－７细胞中，通过琼脂糖凝胶电逡逑泳检测分析可见：内参３－ａｃｔｉｎ表达基本一致，与此对比可见，ＬＶ５－ＩＮＧ３在逡逑ＨＣＣ１９３７和ＭＣＦ－７乳腺癌细胞中使ＩＮＧ３表达明显增加。逡逑６邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ邋结果逡逑从ＨＣＣ１９３７，ＭＣＦ－７细胞中提取的蛋白质做蛋白印迹实验后胶片曝光结果如下逡逑（图邋３６）逡逑１．５－逡逑Ｃ０逡逑

对数期,光镜,细胞,实验要求

图２逡逑图１和图２均是处在对数期生长的ＭＣＦ－７细胞，４０倍光镜下观察，细胞状态良逡逑

细胞迁移,侵染,细胞,统计学

图２０逡逑图１８正常ＨＣＣ１９３７细胞迁移实验，图１９为侵染ＬＶ５－ＩＮＧ３的ＨＣＣ１９３７细胞迁逡逑移实验。图２０表明ＬＶ５－ＩＮＧ３侵染ＨＣＣ１９３７细胞迁移能力下降，具有统计学意逡逑义，Ｐ＜０．０５。逡逑３４逡逑

【参考文献】