黄芪多糖对宫颈癌Hela细胞迁移和侵袭能力的抑制作用
发布时间：2020-08-22 05:10
【摘要】：背景和目的宫颈癌是仅次于乳腺癌的女性常见恶性肿瘤,侵袭转移影响是宫颈癌患者疗效和预后的关键因素。因此,探索抑制宫颈癌侵袭转移的方法对于改善宫颈癌患者的疗效和生存质量具有重要的意义。近年来,中药的抗肿瘤作用越来越受到受到关注,黄芪多糖(astragalus polydsaccharide, APS)是黄芪的主要活性成分之一。越来越多的研究证实APS具有抗肿瘤活性。但是,APS的抗肿瘤作用机制尚未完全明了。目前,尚未见APS对宫颈癌Hela细胞迁移侵袭能力抑制作用及相关机制的研究报道。本研究旨在探讨APS对宫颈癌Hela细胞迁移侵袭能力的抑制作用及相关机制,以期为APS在宫颈癌治疗中的应用提供科学依据。方法1.提取APS并定量。2.根据预实验的结果,实验组：200μg/mL的APS诱导48h的宫颈癌Hela细胞,对照组：不加药的宫颈癌Hela细胞。3.通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验探讨APS对宫颈癌Hela细胞迁移侵袭能力的抑制作用。4.通过Western blotting方法观察APS处理前后宫颈癌Hela细胞中钙粘附蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinase-9, MMP-9)、MMP-2等与肿瘤迁移侵袭相关基因蛋白水平表达的变化。结果1.制备的APS溶液的定量结果为53.623mg/mL。2.划痕实验结果显示：实验组宫颈癌Hela细胞伤口愈合速度慢于对照组。对照组细胞伤口48h基本愈合,72h完全愈合；而实验组细胞伤口72h仍未愈合。3. Transwell迁移和侵袭实验结果显示：与对照组宫颈癌Hela细胞相比,实验组宫颈癌Hela细胞迁移和侵袭穿过transwell小室底膜的数量显著减少(P0.05)。4. Western blotting结果显示：实验组宫颈癌Hela细胞中E-cadherin蛋白水平的表达显著高于对照组宫颈癌Hela细胞(P0.01)。实验组和对照组宫颈癌Hela细胞中MMP-2和MMP-9蛋白水平的表达差异均无显著性(P0.05),但是,与对照组宫颈癌Hela细胞相比,实验组宫颈癌Hela细胞中MMP-2的活性形式显著降低(P0.01),实验组和对照组宫颈癌Hela细胞中均未见MMP-9活性形式条带。结论1.APS对宫颈癌Hela细胞的迁移和侵袭能力具有显著的抑制作用。2. E-cadherin表达增加和MMP-2活性降低可能与APS对宫颈癌Hela细胞迁移和侵袭能力的抑制作用有关。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【图文】：
补体积至５０ｍＬ。上述溶液分别取２ｍＬ置于１５ｍＬ试管中，分别加入５％苯献溶液逡逑１．５ｍＬ和浓梳酸７．５ｍＬ，振摇５ｍｉｎ，置沸水浴中力口热１５ｍｉｎ，冰浴中冷去口邋３０ｍｉｎ。分逡逑别测ＯＤ４９０ｎｍ吸光值（表１），做标准曲线（图１邋）。同上操作测制备的ＡＰＳ的ＯＤ４９０逡逑吸光值，根据标准曲线计算制备的ＡＰＳ溶液的浓度。逡逑表１葡萄糖标准品ＯＤ４９０值（Ｊ±５）逡逑序号逦葡萄糖浓度（ｎｇ／ｍＬ）逦ＯＤ４９０均值逡逑１逦８逦０．１１７±０．００１逡逑２逦１６逦０．２３８±０．００３逡逑３逦２４逦（Ｕ；３２：ｔ０．００１逡逑４逦３２逦０．４６３±０．００２逡逑５逦４０逦０．５５４±０．００２逡逑６逦４８逦０．６７６±０．００３逡逑７逦５６逦０．７９２±0．00３逡逑１２逡逑
逑２．２．２逦Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ邋迁移实验逡逑Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验结果显示（图３，表２）：与对照组宫颈癌Ｈｅｌａ细胞相比，实逡逑验组宫颈癌Ｈｅｌａ细胞迁移穿过ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室底膜的数量显著减少（Ｐ＜化０５）。逡逑渺淀扣．中ｆｔ！逡逑图３邋Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验结果（结晶紫，４００Ｘ）逡逑１：对照}D；２；实验组逡逑表２邋ＡＰＳ对[卑龋澹欤嵯赴ㄒ颇芰Φ挠跋戾义戏肿榇┕∈业啄は赴弑妒右埃ǎ
本文编号：2800302
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【图文】：
补体积至５０ｍＬ。上述溶液分别取２ｍＬ置于１５ｍＬ试管中，分别加入５％苯献溶液逡逑１．５ｍＬ和浓梳酸７．５ｍＬ，振摇５ｍｉｎ，置沸水浴中力口热１５ｍｉｎ，冰浴中冷去口邋３０ｍｉｎ。分逡逑别测ＯＤ４９０ｎｍ吸光值（表１），做标准曲线（图１邋）。同上操作测制备的ＡＰＳ的ＯＤ４９０逡逑吸光值，根据标准曲线计算制备的ＡＰＳ溶液的浓度。逡逑表１葡萄糖标准品ＯＤ４９０值（Ｊ±５）逡逑序号逦葡萄糖浓度（ｎｇ／ｍＬ）逦ＯＤ４９０均值逡逑１逦８逦０．１１７±０．００１逡逑２逦１６逦０．２３８±０．００３逡逑３逦２４逦（Ｕ；３２：ｔ０．００１逡逑４逦３２逦０．４６３±０．００２逡逑５逦４０逦０．５５４±０．００２逡逑６逦４８逦０．６７６±０．００３逡逑７逦５６逦０．７９２±0．00３逡逑１２逡逑
逑２．２．２逦Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ邋迁移实验逡逑Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验结果显示（图３，表２）：与对照组宫颈癌Ｈｅｌａ细胞相比，实逡逑验组宫颈癌Ｈｅｌａ细胞迁移穿过ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室底膜的数量显著减少（Ｐ＜化０５）。逡逑渺淀扣．中ｆｔ！逡逑图３邋Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验结果（结晶紫，４００Ｘ）逡逑１：对照}D；２；实验组逡逑表２邋ＡＰＳ对[卑龋澹欤嵯赴ㄒ颇芰Φ挠跋戾义戏肿榇┕∈业啄は赴弑妒右埃ǎ
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