放疗对角质形成细胞上皮间质转化的影响

发布时间：2020-08-22 13:59

【摘要】：研究背景：瘢痕疙瘩是一种病理性瘢痕,在临床上非常多见,具有发红、瘙痒、刺痛和烧灼感等显著的临床表现,给患者带来很大的生理和心理负担。瘢痕疙瘩的发病机制并不明确,最新研究发现瘢痕疙瘩的发生可能与上皮间质转化(EMT)相关,瘢痕疙瘩中的成纤维细胞可能是角质形成细胞经EMT转化而来。瘢痕疙瘩的治疗方法众多,但无论是手术还是单一无创治疗的复发率均较高。手术切除联合术后放疗的方法是治疗瘢痕疙瘩最有效的方法。目前尚无研究从EMT角度出发探索术后放疗抑制瘢痕疙瘩复发的作用机制。研究目的：探索放疗对人角质形成细胞上皮间质转化的影响。研究方法：对人永生化角质形成细胞HaCaT细胞给予10ng/ml TGF-β1处理,以未经处理的角质形成细胞作为阴性对照,以从手术标本原代培养得到的成纤维细胞作为阳性对照,观察细胞的形态变化,测定处理后1天、3天与7天上皮化与间质化标志物的表达,确认是否成功构建EMT模型。对一组HaCaT细胞进行9Gy放疗,对另一组HaCaT细胞同时给予9Gy放疗与10ng/ml TGF-β1处理。观察阴性对照组、放疗组与放疗联合TGF-β组细胞的形态变化,进行划痕实验检测细胞的迁移能力,测定处理后1天、3天与7天上皮化与间质化标志物的表达。结果：1.对HaCaT细胞进行10ng/ml TGF-β1处理后,观察到细胞形态从典型的角质形成细胞形态转变为类似成纤维细胞的形态；而放疗后细胞形态未发生明显的变化,同时细胞死亡速率加快。2.划痕实验结果显示未经处理的HaCaT细胞迁移能力最弱,在TGF-1诱导下发生了EMT的细胞迁移能力最强,对HaCaT细胞行放疗之后,细胞的迁移能力略有增强,对HaCaT行放疗与TGF-β1双重处理之后,细胞的总体迁移能力与单纯行TGF-β1处理相似,略弱于后者。3.经过TGF-β1处理后1天、3天和7天细胞的上皮化标志物ZO-1与CDH1的基因表达和蛋白表达显著下调(P0.05),间质化标志物CDH2的基因表达与蛋白表达上调,FN1的基因表达显著上调(P0.05),Vimentin的蛋白表达上调。4.放疗后培养1天与3天的细胞中上皮化标志物的基因表达和蛋白表达均上调,间质化标志物的基因表达和蛋白表达下调。5.放疗联合TGF-β1组细胞除了E-Cadherin蛋白表达之外,其余上皮化标志物的基因表达和蛋白表达均高于TGF-β1组；间质化标志物除了CDH2的基因表达与TGF-β1组相似,其余标志物的基因表达和蛋白表达低于TGF-β1组。结论：TGF-β1成功地构建了HaCaT细胞EMT环境。放疗对HaCaT细胞EMT的影响总体以抑制为主。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.55
【图文】：

结果逡逑１．细胞生长形态观察逡逑Ｃｔｒｌ组、ＦＢ组与Ｔ组细胞形态见图１－１至图１－５。逡逑图１－１显示Ｃｔｒｌ组细胞具有典型的角质形成细胞的形态，细胞呈多边形，连成逡逑片状，呈典型的铺路石样。逡逑图１－２显示ＦＢ组细胞具有典型的成纤维细胞形态，细胞呈长梭形，胞核较大，逡逑呈扁卵圆形。逡逑图１－３至图１－５为Ｔ组细胞在经过ＴＧＦ－ｐｉ处理后１天、３天和５天的形态变化。逡逑可Ｗ观察到Ｔ组细胞第１天的形态与Ｃｔｒｌ组相似，即细胞呈多边形，连成片状，具逡逑有典型的铺路石样。第３天细胞形态开始发生变化，细胞彼此之间的联系变得疏松，逡逑细胞形态变得狭长，形态介于ＨａＣａＴ细胞与成纤维细胞么间，胞浆丰富，呈分泌型。逡逑图１－５显示Ｔ组细胞经过５天的ＴＧＦ－ｐｉ处理后，形态基本同成纤维细胞，呈现长逡逑梭形

ＲＴ巧组：第１、３天分别对ＲＴ＋Ｔ－ｌｄ和ＲＴ＋Ｔ－３ｄ亚组细胞进斤划痕实验，在逡逑划痕后２４小时和４８小时分别观察细胞迁移情况。逡逑如图４所示，使用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ邋Ｐｌｕｓ邋ｖ６．０软件打开图片后，设定放大倍数５０％，逡逑随机划取６条水平线，计算细胞间距离的均值，Ｗ加间距为参照，计算２４ｈ和４８ｈ逡逑间距与Ｏｈ间距相比的百分比。使用ＧｒａｐｈＰａｄ邋Ｐｒｉｓｍ５作．０１软件进行统计学分析（使逡逑用双尾非配对ｔ检验）和作图。逡逑图４使用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ邋Ｐｌｕｓ计算划痕间距举例逡逑３９逡逑

图６细胞迁移情况

【共引文献】

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本文编号：2800764