miR-155在肝癌中的表达及其对肝癌侵袭转能力的影响

发布时间：2020-08-25 15:37

【摘要】：目的:检测mi R-155在肝癌标本及细胞系中的表达情况,探讨mi R-155在肝癌发生发展过程中的生物学功能,并探究其与肝癌侵袭转移的关系,为肝癌的诊治及预后判断提供新的策略。方法:1、用人肝癌细胞Hep G2和Hu H7和正常肝细胞HL-7702,并收集30例原发性肝癌癌组织标本,癌旁组织,12例正常肝组织标本,运用q RT-PCR技术检测mi R-155在肝癌组及正常对照组中的表达。2、由慢病毒介导将基因mi R-155转染至mi R-155表达量低的细胞株(Hu H-7)中,将抑制剂inhibitor(mi R-155 inhibitor)转染至表达量高的细胞株(Hep G2)中,通过MTT检测细胞增殖,流式细胞仪技术检测转染后细胞周期变化,以及应用划痕愈合试验、Transwell试验了解其对细胞迁移、侵袭的影响。3、通过q RT-PCR技术检测上皮间质转化(EMT)表型相关因子基因的表达及Western blot检测相关蛋白的表达,分析mi R-155与EMT的关系。4、通过q RT-PCR分析mi R-155与肿瘤大小及有无远处转移的关系,了解其对原发性肝癌发生、发展及预后的影响。结果:1、mi R-155在肝癌细胞系中的表达明显高于对照组,其中Hep G2细胞株表达量较高,Hu H7细胞株表达量较低,mi R-155在肝癌组织中的表达量明显高于癌旁组织和正常组织(P0.05)。2、Hu H7细胞株在转染mi R-155后细胞增殖和细胞周期变化不明显,细胞的迁移及侵袭能力增强,转染mi R-155 inhibitor至Hep G2细胞株后,细胞增殖和细胞周期变化也不明显,而细胞的迁移及侵袭能力减弱。3、Hu H7细胞株在转染mi R-155后上皮表型CDH1的m RNA及蛋白表达减少,而间质表型snai1和zeb1的m RNA及蛋白表达增加。Hep G2细胞株在转染mi R-155 inhibitor后,呈现出相反的结果。4、临床统计分析mi R-155与肝癌的大小无关,与有无远处转移明显相关。结论:本实验表明mi R-155在肝癌细胞中呈高表达,并能够通过促进EMT增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力,进而提高肝癌的转移作用。因此,mi R-155可成为监测肝癌预后的一个新的指标。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【图文】：

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第三章结果 miR-155 在肝癌中的表达及其对肝癌侵袭转移能力的影响第三章结果1 R-155 在肝癌细胞及组织样本中的表达情况1.1 miR-155 基因和内参 U6 基因的溶解曲线为测定肝癌组和正常对照组中 miR-155 的表达量，本实验采用实时荧光定量PCR 技术来进行检测，以 U6 为内参（图 1）。

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第三章结果 miR-155 在肝癌中的表达及其对肝癌侵袭转移能力的影响图 3 慢病毒介导的 miR-155 转染肝癌细胞 HepG2 和 HuH7 的情况由图 3 所见：转染 miR-155 inhibitor 的 HepG2 细胞 miR-155 的表达量变化不明显，而转染 miR-155 的 HuH7 的表达量明显升高（*P<0.05）。4 miR-155 对肝癌细胞活力的影响MTT 是一种四氮唑盐化合物，活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能将黄色的 MTT 还原

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图 3 慢病毒介导的 miR-155 转染肝癌细胞 HepG2 和 HuH7 的情况由图 3 所见：转染 miR-155 inhibitor 的 HepG2 细胞 miR-155 的表达量变化不明显，而转染 miR-155 的 HuH7 的表达量明显升高（*P<0.05）。4 miR-155 对肝癌细胞活力的影响MTT 是一种四氮唑盐化合物，活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能将黄色的 MTT 还原成蓝黑色可溶于有机溶剂的甲佨(Formazan)，同时，甲佨生成量与活细胞数成正比，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中的蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的 Formazan 量成正比，最后用酶标仪测定 OD 值可间接反应细胞的活力。

【参考文献】