miRNA-149-3p在胃炎和胃癌中的作用
发布时间：2020-09-11 21:33
胃炎是一种十分常见的消化系统疾病,许多研究表明,长期的胃炎也会增加罹患胃癌的风险;因此,研究胃炎的发生、发展具有十分积极的意义。NF-κB信号通路与炎症、癌症的生理过程关系非常密切,由该通路转录的许多基因参与胃炎及胃癌生理过程的调控。MiRNA(microRNA))作为一类非编码RNA,虽然自身不能直接编码蛋白参与调控;但是它可以通过碱基互补配对靶向目的基因的3'非翻译区或者5'非翻译区,从而调节目的目的基因的转录水平,进而参与体内调控。众多的研究表明,microRNA在各类炎症反应以及癌症发生、发展过程中都发挥着十分重要的作用。我们发现,miRNA-149-3p可以通过拮抗NF-κB通路抑制胃炎。课题主要在体内、体外两个方向上证实了上述实验结论。在体内实验中,通过腹腔注射LPS,使得WT小鼠以及149-3pKO小鼠都出现了炎症反应,小鼠胃组织内COX-2、iNOS、MCP-1这些NF-κB通路的靶向基因都有了显著的表达上调,这种促炎基因表达上调的趋势在KO小鼠组织内更为明显;这样的趋势在对WT小鼠与KO各自的组织进行病理学分析后也得到了证实。为了进一步探究miRNA-149-3p在胃炎中的作用,我们通过尾静脉注射miR-149-3p模拟物来提高miR-149-3p在小鼠体内的表达水平;随后使用LPS处理小鼠,发现miRNA-149-3p可以抑制LPS诱导的炎症基因的表达。在体内实验中,利用miRNA-149-3p的模拟物使得其在胃癌细胞内高表达进而研究其功能。结果显示,过量表达miR-149-3p后会抑制MMP1、MCP-1、IFN-γ这些基因的表达;紧接着,利用LPS处理细胞诱导细胞产生炎症反应,从实验结果中可以发现,miR-149-3p可以明显抑制由LPS诱导的MCP-1、TNFα、IP-10等基因的表达。随后,利用细胞因子TNFα来激活细胞内的NF-κB信号通路,过量表达的miR-149-3p可以明显抑制NF-κB通路下游基因的表达。我们利用Western Blot手段来探究miR-149-3p过量表达对NF-κB通路蛋白水平上的作用,结果显示miR-149-3p可以抑制TNFα诱导的IκBα蛋白额磷酸化。随后的荧光素酶报告基因实验结果也表明,miR-149-3p可以抑制NF-κB通路的转录活性。通过上述的实验结果表明,miRNA-149-3p可以拮抗NF-κB信号通路从而抑制胃炎。这些发现表明,miR-149-3p是治疗胃炎的潜在治疗靶点,其模拟物为治疗和预防与胃炎相关的疾病提供了可能的治疗方案。
【学位单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.2;R573.3
【部分图文】：
图１－１邋ＮＦ－ｋＢ信号通路活化过程逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｈｅ邋ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ＮＦ－ｋＢ邋Ｓｉｇｎａｌ邋ｐａｔｈｗａｙ逡逑ｋＢ通路可以调控细胞增殖、细胞凋亡和血管生成的多个细胞生理，ＮＦ－ｋＢ既可以作为极具潜力的治疗靶点，同时也可以成为诊标记。逡逑炎逡逑炎的概述逡逑是由许多因素引起的宿主反应，包括但是不局限于促炎介质，环染［６（３，６１］。更为重要的是，在癌症的背景下，炎症在某些生理过程键的作用，诸如控制感染、伤口愈合等。简而言之即是响应组织在
３．１．２邋ｍｉＲＮＡ１４９－３ｐ缺失小鼠对ＬＰＳ诱导的炎症更敏感逡逑取出小鼠的胃组织，提取组织ＲＮＡ，定量逆转录并使用荧光定量ＰＣＲ检测逡逑组织内促炎症基因的表达水平，结果如图３－１、３－２所示。逡逑ＩＬ－１０逦ＩＬ－１３逡逑８邋８逡逑＊逡逑＊逡逑６邋－逦ｔ邋６逦－逡逑ｉ２逦Ｉ逡逑Ｏ逡逑＾逦ＷＴ逦ＫＯ逦ＷＴ逦ＫＯ逡逑￡逡逑Ｑ）逡逑之逦ＣＯＸ－２逡逑＾邋６逡逑＊５３逡逑Ｑ：逦＊逡逑４邋－逡逑：：＾逦Ｌ逡逑ＷＴ逦ＫＯ逡逑图３－１邋ＷＴ与ＫＯ小鼠炎症基因的表达逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ邋ｇｅｎｅｓ邋ｉｎ邋ＷＴ邋ａｎｄ邋ＫＯ邋ｍｉｃｅ逡逑ＣＯＸ－２邋（环氧化酶－２），环氧酶是前列腺素（ＰＧＥ）体内自行合成生理途径中逡逑３４逡逑
ａｇｏｍｉｒ；邋ＬＰＳ：注射邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ａｇｏｍｉｒ，后腹腔注射邋ＬＰＳ；邋ｍｉＲ－１４９＊＋ＬＰＳ：注射邋ｍｉＲ－１４９－逡逑３ｐ邋ａｇｏｍｉｒ，再腹腔注射ＬＰＳ。）逡逑从图３－３Ａ中的实验结果可以看出，在尾静脉注射ｍｉＲ－１４９－３ｐ的ａｇｏｍｉｒ之逡逑后，小鼠胃组织内ｍｉＲ－１４９－３ｐ的表达水平上升明显。实验结果表明，ｍｉＲ－１４９－逡逑３ｐ已经在胃组织内稳定的高表达。逡逑从图３－３Ｂ、Ｃ的实验结果可以看出，当小鼠注射ＬＰＳ后，体内ＮＦ－ｋＢ信号逡逑通路下游促炎症基因ＣＯＸ－２、ＩＬ－ｉｐ、ＴＮＦａ的表达水平上调明显。ＩＬ－ｌｐ邋（白细逡逑胞介素－１）、ＴＮＦａ邋（肿瘤坏死因子）都是ＮＦ－ｋＢ信号通路下游的重要靶向基因。逡逑文献报道指出，降低ＩＬ－Ｐ表达水平可以减少小鼠体内胃癌的体积［７５］。然而，当逡逑小鼠体内高表达ｍｉＲ－丨４９－３ｐ后，体内促炎症基因的表达水平得到了明显的抑制，逡逑这进一步证实了邋ｍｉＲ－４９－３ｐ具有抑制炎症的功能。逡逑３．邋１．４邋ＤＥＮ诱导小鼠炎症模型逡逑选取４周大的雌性ＫＯ小鼠以及ＷＴ小鼠，按体重分组后；小鼠腹腔注射逡逑ＤＥＮ邋（１００邋ｍｇ／Ｋｇ），注射后４８小时处死小鼠，收集小鼠胃部组织并制备组织石逡逑蜡切片，随后对组织石蜡切片进行一系列病理学检测。逡逑３．１．４．丨ＤＥＮ处理小鼠ＨＥ染色结果逡逑ＣＯ＞逦ＤＥＮ逡逑ｍＫｅｍ逡逑图３－４邋ＤＥＮ处理小鼠胃组织ＨＥ染色逡逑Ｆｉｇ．３－４邋ｔｈｅ邋ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋ｓｔｏｍａｃｈ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｂｙ邋ＤＥＮ逡逑从图３－４的ＨＥ染色结果可以发现
本文编号：2817202
【学位单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.2;R573.3
【部分图文】：
图１－１邋ＮＦ－ｋＢ信号通路活化过程逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｈｅ邋ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ＮＦ－ｋＢ邋Ｓｉｇｎａｌ邋ｐａｔｈｗａｙ逡逑ｋＢ通路可以调控细胞增殖、细胞凋亡和血管生成的多个细胞生理，ＮＦ－ｋＢ既可以作为极具潜力的治疗靶点，同时也可以成为诊标记。逡逑炎逡逑炎的概述逡逑是由许多因素引起的宿主反应，包括但是不局限于促炎介质，环染［６（３，６１］。更为重要的是，在癌症的背景下，炎症在某些生理过程键的作用，诸如控制感染、伤口愈合等。简而言之即是响应组织在
３．１．２邋ｍｉＲＮＡ１４９－３ｐ缺失小鼠对ＬＰＳ诱导的炎症更敏感逡逑取出小鼠的胃组织，提取组织ＲＮＡ，定量逆转录并使用荧光定量ＰＣＲ检测逡逑组织内促炎症基因的表达水平，结果如图３－１、３－２所示。逡逑ＩＬ－１０逦ＩＬ－１３逡逑８邋８逡逑＊逡逑＊逡逑６邋－逦ｔ邋６逦－逡逑ｉ２逦Ｉ逡逑Ｏ逡逑＾逦ＷＴ逦ＫＯ逦ＷＴ逦ＫＯ逡逑￡逡逑Ｑ）逡逑之逦ＣＯＸ－２逡逑＾邋６逡逑＊５３逡逑Ｑ：逦＊逡逑４邋－逡逑：：＾逦Ｌ逡逑ＷＴ逦ＫＯ逡逑图３－１邋ＷＴ与ＫＯ小鼠炎症基因的表达逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ邋ｇｅｎｅｓ邋ｉｎ邋ＷＴ邋ａｎｄ邋ＫＯ邋ｍｉｃｅ逡逑ＣＯＸ－２邋（环氧化酶－２），环氧酶是前列腺素（ＰＧＥ）体内自行合成生理途径中逡逑３４逡逑
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