PPA1在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其对细胞增殖及凋亡的影响

发布时间：2020-09-14 19:57

　　弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(NHL)中最常见类型,占全部NHL患者的30%-40%。具有高度异质性,不同亚型具有不同临床特征、遗传学改变和治疗反应。R-CHOP为基础的联合治疗方案是目前DLBCL的标准方案,使得患者的5年生存期达到60%-70%,约30%-50%的患者会因药物抵抗或疾病迅速复发而死亡。因此,该病目前仍是不可治愈的恶性疾病。肿瘤的发生发展是一个涉及多基因表达异常及转录后调控异常的复杂过程,然而任何生物反应的改变均伴随着能量的变化,因而能量代谢异常在肿瘤发生发展中的作用也越来越受到研究者的重视,目前认为代谢改变是肿瘤的一个新特征,癌细胞通过代谢改变维持其高增殖率。PPA1为无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase,PPase)的家族成员之一,通过水解无机焦磷酸盐(PPi)为2分子的正磷酸盐(Pi),同时释放能量,还可以使H~+从胞质泵入膜内,起到质子泵的作用。同时在特定条件下可作为能量供体和ATP替代物,在细胞生长发育中也具有重要作用。目前关于PPA1与肿瘤的相关研究提示其在多种实体肿瘤中高表达,这与PPA1能够满足恶性肿瘤快速生长、异常分化过程中能量供给需求增加相关。然而PPA1在血液肿瘤尤其是高度异质性的DLBCL中的作用尚未见报道。本课题旨在探讨PPA1在弥漫性大B细胞淋巴瘤的表达及其表达与临床特征之间的相关性,并通过体内外实验探讨PPA1对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响及可能机制,为PPA1能否成为弥漫性大B细胞淋巴瘤新的检测指标用于早期诊断、预后判断及治疗靶点的选择。我们首先采用免疫组化的方法检测了65例DLBCL患者和20例反应性淋巴结增生的患者中PPA1的表达情况。结果显示PPA1在DLBCL患者的表达明显高于对照组(p0.05),其高表达与患者B症状和IPI评分相关(p0.05)。接着,分别采用Real-time PCR和Western blot法检测了PPA1在DLBCL细胞系及正常人永生B淋巴细胞中的表达,结果显示,与对照组相比,PPA1在大部分DLBCL细胞系中高表达(p0.05),PPA1蛋白水平在DLBCL中均明显增高(p0.05)。然后,我们采用RNA干扰技术研究了PPA1基因沉默后对DLBCL细胞系增殖和凋亡的影响。结果显示沉默PPA1后DLBCL细胞增殖能力减低,凋亡明显增加(p0.05)。进一步的机制探讨中我们发现沉默PPA1后DLBCL中P53和P21表达量明显增加,可能机制为通过调节JNK-P53通路来影响细胞增殖。同时发现沉默PPA1后caspase3剪切体表达量明显增加,提示PPA1可能通过下调caspase3剪切体进而抑制细胞调亡过程的。总之,本研究揭示PPA1在DLBCL发生发展中具有重要意义,为其成为新的靶标用于疾病早期诊断、预后分层及治疗提供了理论依据。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R733.1
【部分图文】：

不同表达,细胞系,情况,亚型

图 4.1 PPA1 不同表达情况及在 DLBCL 组织中的分布Figure 4.1 Different expression of PPA1 and distribution in DLBCL organization2 PPA1 在弥漫性大 B 细胞淋巴瘤细胞系中的表达为了进一步在细胞水平验证 PPA1 在 DLBCL 中的表达情况，分别采用Real-time PCR 和 Western blot 方法检测对照组细胞：人正常 B 细胞永生化细胞系HMy2.CIR 和 DLBCL 细胞系：OCI-Lyl9、SU-DHL-4、VAL、SU-DHL-2 和 SU-DHL-8中PPA1的表达情况。其中DLBCL细胞系包括ABC亚型（SU-DHL-2和SU-DHL-8）和 GCB 亚型（OCI-Lyl9、SU-DHL-4 和 VAL）。2.1 Real-time PCR 检测 PPA1 在弥漫性大 B 细胞淋巴瘤细胞系中的表达PPA1 的 mRNA 表达量是相对于 GAPDH 的相对表达量，PPA1 在不同 DLBCL

表达水平,细胞系,细胞,淋巴

在细胞水平验证 PPA1 在 DLBCL 中的表达 Western blot 方法检测对照组细胞：人正常 BCL 细胞系：OCI-Lyl9、SU-DHL-4、VAL、SU-D况。其中DLBCL细胞系包括ABC亚型（SU-DI-Lyl9、SU-DHL-4 和 VAL）。CR 检测 PPA1 在弥漫性大 B 细胞淋巴A 表达量是相对于 GAPDH 的相对表达量，P况以均数±标准差（ x ±x）表示，结果显示：A 在 DLBCL 中都有表达，在部分细胞系中表情况如图 4.2。

细胞系,全蛋白质,学位论文,医科大学

重庆医科大学博士研究生学位论文2.2 Western blot 检测 PPA1 在弥漫性大 B 细胞淋巴瘤细胞系中的表达分别收集 HMy2.CIR 和 DLBCL 各细胞系全蛋白质，采用 Western blot 检测PPA1 的表达，PPA1 的表达是其与β-actin 的相对表达量，结果显示，PPA1 蛋白表达水平在 DLBCL 中明显高于 HMy2.CIR（P<0.05）。其在 HMy2.CIR 和 DLBCL各细胞系中的表达情况如图 4.3 所示。

【参考文献】