沉默FoxM1基因对食管鳞癌ECA-109细胞的上皮间质转化的影响及相关研究

发布时间：2020-09-22 10:49

　　目的:观察沉默转录因子FoxM1基因对食管鳞癌ECA-109细胞的上皮间质转化的影响,以及FoxM1基因的表达量下调后对食管鳞癌ECA-109细胞迁移能力的影响,探讨FoxM1基因在上皮间质转化的作用机制。方法:FoxM1干扰载体转染食管鳞癌ECA-109细胞,观察各组细胞的荧光表达情况以及转染效率,转染48h后采用RT-PCR、Western-blot方法检测目的基因FoxM1、上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin的mRNA以及蛋白表达情况,并且选择干扰效果最强组进行正式实验。通过脂质体lipofectamine2000介导FoxM1-shRNA和NC-shRNA转染食管鳞癌ECA-109细胞,分成三组:即(未转染的食管鳞癌ECA-109细胞正常组)、(NC-shRNA阴性对照组)、(FoxM1-shRNA),并采用RT-PCR及Western-blot检测每组细胞FoxM1和上皮间质标志物的表达情况。用划痕实验检测FoxM1的表达量下调后对食管鳞癌ECA-109细胞的迁移能力的影响。结果:1.筛选FoxM1-shRNA对食管鳞癌ECA-109细胞的干扰效率Western-blot和RT-PCR结果显示两组阳性干扰载体shRNA1、shRNA2,与对照组和阴性对照组NC-shRNA比较,shRNA2的干扰效率显著高于其他三组(p0.01),因此,选取shRNA2干扰质粒进行后续正式实验。2.FoxM1-shRNA转染食管鳞癌ECA-109细胞后FoxM1对上皮间质标志物E-cadherin、Vimentin表达的影响Western-blot和RT-PCR结果显示,与对照组及空载体转染组比较,shRNA转染组细胞内FoxM1表达降低,差异具有统计学意义(p0.05);Western-blot结果显示,与对照组及空载体转染组比较,shRNA转染组细胞内Vimentin蛋白的表达降低,E-cadherin蛋白表达增加,差异具有统计学意义(p0.05)。3.FoxM1基因表达下调后对食管鳞癌ECA-109细胞的迁移能力的影响划痕实验结果显示,24小时后对照组以及转染空质粒的阴性对照组细胞划痕两侧的细胞向裸露区域迁移的趋势较明显,48小时后对照组以及转染空质粒的阴性对照组细胞裸露的中间区域基本长满细胞。而shRNA干扰组细胞的划痕仍明显可见。结论:1.沉默FoxM1可以诱导食管鳞癌ECA-109细胞由间质表型向正常上皮表型细胞转化。2.Fox M1基因表达下调后降低了食管鳞癌ECA-109细胞的迁移能力。
【学位单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：R735.1

【参考文献】