血小板促进甲状腺未分化癌侵袭转移的机制研究
发布时间：2020-10-11 11:55
[目的]我们既往研究发现外周血血小板计数与甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)预后呈负相关,因此推测血小板可能参与了 ATC的进展。血小板已被报道跟多种肿瘤远处转移密切相关,我们推测血小板可能参与了促进ATC侵袭转移的过程。本研究拟探索血小板与ATC侵袭转移相关性并进一步探讨其机制。[方法]体外分离健康成年人外周血血小板;Transwell侵袭和迁移实验检测血小板对甲状腺未分化癌细胞株侵袭和迁移能力的影响;动物实验进一步验证血小板对甲状腺未分化癌侵袭转移的影响;Transwell侵袭和迁移实验检测ATC细胞与血小板共培养后的细胞上清对ATC细胞侵袭迁移能力的影响;流式细胞术检测凝血酶刺激血小板后血小板活化情况;人细胞因子抗体芯片检测单纯甲状腺未分化癌细胞组、与血小板共培养组及单纯活化血小板组之间差异较明显的细胞因子;Transwell实验进一步验证芯片筛选出的差异较明显的细胞因子是否促进ATC细胞侵袭迁移;Real-time PCR及Western blot技术分别检测基因CCL3的受体CCR1、CCR5的mRNA及蛋白表达水平;siRNA技术分别下调CCR1和CCR5在甲状腺未分化癌细胞株中的表达,Western blot检测CCR1和CCR5的敲低效果,Transwell实验分别检测敲低CCR1和CCR5后对CCL3促进甲状腺未分化癌细胞侵袭和迁移能力的影响;分子克隆技术构建靶向过表达人CCR5质粒pMSCV-CCR5;逆转录病毒方法建立稳定内源性过表达CCR5基因的甲状腺未分化癌细胞株;Real-time PCR及Western blot技术分别检测靶基因CCR5的mRNA及蛋白表达水平变化后,Transwell侵袭和迁移实验检测其侵袭和迁移能力变化;Western blot检测相关通路分子水平变化。[结果]体内外实验均证实血小板促进ATC侵袭和迁移;Transwell实验发现ATC细胞株与血小板共培养后的细胞上清明显增加其侵袭迁移能力;流式细胞术证实凝血酶能体外激活血小板;人细胞因子抗体芯片筛选出差异明显的细胞因子CCL3,并且侵袭和迁移实验证实CCL3能促进ATC侵袭转移;Transwell实验和siRNA技术发现CCL3是通过CCL3-CCR5轴参与血小板促ATC侵袭转移过程;成功构建稳定过表达CCR5的甲状腺未分化癌细胞株;Transwell实验证实过表达CCR5可促进CCL3对ATC细胞的侵袭和迁移能力。Western blot发现CCL3-CCR5轴通过激活NF-κB信号通路上调MMP-1蛋白的表达进而参与血小板促ATC侵袭转移过程。[结论]血小板能促进ATC侵袭和转移,活化的血小板分泌的CCL3通过与其受体CCR5相互结合发挥作用,并进一步激活NF-κB信号通路上调MMP1蛋白的表达从而参与血小板促ATC侵袭转移过程。本研究结果为探索和治疗ATC转移提供了新思路、新方向。
【学位单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R736.1
【部分图文】：
?昆明医科大学２０１８届硕士研宄生学位论文???结果??１、体外实验发现血小板能显著促进ＡＴＣ细胞侵袭迁移??Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ方法检测血小板对ＡＴＣ细胞株（ＡＲＯ、ＳＷ５７９）侵袭迁移的影响，??结果发现血小板能促进ＡＴＣ细胞的迁移和侵袭（图１Ａ和图１Ｂ）（注：血小板单??独行ｔｍｎｓｗｅｌｌ实验不会粘附于小室膜）??ＰＩ?Ｔ：ＡＲＯ?＇－ｉ??
一??？關盡？??图２?（Ａ）肺组织Ｈ－Ｅ染色病理检查比较血小板处理的ＡＲＯ细胞移植组与单纯ＡＲＯ细胞移??植组肺微转移灶数量；（Ｂ）肺组织Ｈ－Ｅ染色病理检查比较血小板处理的ＳＷ５７９细胞移植组??与单纯ＳＷ５７９细胞移植组肺微转移灶数量。??３、ＡＴＣ细胞与血小板共培养后的细胞上清能促进ＡＴＣ细胞侵袭迁移能力??ＡＲＯ细胞和血小板数目以１：４００于１２孔板中分别共培养２４ｈ和４８ｈ，分别??标记共培养２４ｈ的细胞上清为ｃｅｌｌ?ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ－１和共培养４８ｈ的细胞上清为ｃｅｌｌ??ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ－２，利用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ方法检测与血小板共培养后的细胞上清对ＡＲＯ细??胞侵袭迁移的影响，结果发现与血小板共培养的细胞上清能促进ＡＴＣ细胞的迁??移和侵袭能力，且在一定时间内随着共培养时间的增加，其对ＡＴＣ细胞侵袭迁??移的作用也增强，结果见图３。??ｉ?ｔ＇ｌｌ?ＨＭＪＵＴＩＩｉｌｔｉｔｎｌ??
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【参考文献】
本文编号：2836558
【学位单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R736.1
【部分图文】：
?昆明医科大学２０１８届硕士研宄生学位论文???结果??１、体外实验发现血小板能显著促进ＡＴＣ细胞侵袭迁移??Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ方法检测血小板对ＡＴＣ细胞株（ＡＲＯ、ＳＷ５７９）侵袭迁移的影响，??结果发现血小板能促进ＡＴＣ细胞的迁移和侵袭（图１Ａ和图１Ｂ）（注：血小板单??独行ｔｍｎｓｗｅｌｌ实验不会粘附于小室膜）??ＰＩ?Ｔ：ＡＲＯ?＇－ｉ??
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【参考文献】
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本文编号：2836558
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