基于表面等离子共振的早期肝癌标志物的联合检测方法

发布时间：2020-10-14 03:48

　　 原发性肝癌位于我国癌症死因的第二位,总体死亡率和发病率呈现上升趋势。早期肝癌诊断可以提高肝癌患者治疗效果,改善预后,是提高肝癌患者生存率的重要手段,但是传统的检测方法无法有效及准确的对肝癌进行早期诊断。本论文提出基于表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)的早期肝癌标志物的联合检测方法,并选择甲胎蛋白(Alpha Fetoprotein,AFP)与miRNA-125b作为联合检测标志物,提高诊断灵敏度与特异性,有望实现对肝癌的早期诊断,改善肝癌患者的存活率。本论文针对血清中AFP与miRNA-125b的联合、特异性、高灵敏度浓度测量,主要完成了以下工作:首先,选用基于SPR的Biacore 3000检测系统,利用其微流体系统的四通道设计,通过单通道选通修饰与四通道串联测量的有机结合,仅需单份微量患者血清样品,便可以实现其中AFP与miRNA-125b的联合定量检测。同时,通过在四通道中选择第一通道,将其设置为参考通道,消除背景光及其他环境因素的干扰。接着,选用CM5芯片,利用芯片表面的葡聚糖,通过共价键结合在芯片的金膜表面修饰AFP与miRNA-125b的生物探针,消除血清中复杂成分(例如,蛋白质、葡萄糖、激素等)的干扰,实现对AFP与miRNA-125b的特异性检测。实验中将与miRNA-125b碱基互补配对的DNA探针修饰在第二通道的传感区域,将抗AFP单克隆抗体修饰在第三通道的传感区域,实验结果表明,实现了对AFP与miRNA-125b特异性检测,但是这种直接检测法的灵敏度不高,无法满足血清中检测要求。然后,分别采用双抗夹心法和S9.6抗体增强法,提高AFP与miRNA-125b的SPR响应信号和检测灵敏度,实现血清中AFP与miRNA-125b的低浓度检测。实验结果表明,双抗夹心法能够提高AFP的检测灵敏度,可以实现临床浓度范围0-400ng/mL的精确检测;S9.6抗体增强法能够提高miRNA-125b的检测灵敏度,最小检测浓度可以达到200pM。最后,应用双抗夹心法和S9.6抗体增强法修饰的CM5芯片对AFP(0-400ng/mL)与miRNA-125b(0-1000pM)进行了联合检测实验,验证了本论文提出的联合检测方法在早期肝癌诊断中的可行性。
【学位单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.7;O646.9
【部分图文】：

(a) (b)图 2-2 (a) SensiQ 测量系统图; (b) SensiQ Discovery 测量系统图 与 SensiQ Discovery 是以 SPR 技术为基础的半自动通道生物仪。如图 2-2 所示，SensiQ 与 SensiQ Discovery 具有先进的光的微流控系统、多样的芯片表面修饰、简单方便的控制软件件，是应用广泛的生物分子相互作用检测系统。SensiQ 与出现，使得科研机构获得生物分子间相互作用的动力学和亲。这些生物分子相互作用的检测结果有助于开发药物、研究细开发抗体筛选等。 与 SensiQ Discovery 内部应用的 Spreeta 光学传感器，该传感ann 棱镜结构，测量结果具有较好的灵敏度和稳定性。作为内ta 传感器安装方便，几秒钟即可轻松完成。此外，用户可以多种化学修饰，用于研究不同生物分子之间的相互作用。在微个纳升数量级的流通通道，将其中一个作为参考通道，用于

图 2-3 SensiQ Pioneer 测量系统图ensiQ Pioneer 的内部微流控系统，件，制作工艺精细和经久耐用。在该液的情况，确保系统可以正常使用命。由于该系统具有全自动的三通方式，可以检测多种生物分子之间通量和高灵敏度的需求。对于不现全自动配置具有不同浓度的待测动吸入缓冲液与待测样品混合，产人为配置溶液带来的误差。该方法剂样品以及传感器消耗。

天津大学硕士学位论文性re 系列检测系统的配套传感芯，核酸，碳水化合物等各种配体的载玻片，金膜表面修饰了一层配体连接在芯片表面，实现对待一些有机溶剂中，芯片表面上面修饰上配体后，配体的稳定时测量 AFP 和 miRNA-125b 的M5 芯片上，具有一层葡聚糖，定在金膜表面的不同区域，实
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本文编号：2840132