利用噬菌体随机肽库筛选膀胱癌EJ细胞导向肽的实验研究

发布时间：2020-10-14 21:11

　　 目的:利用噬菌体随机七肽库体外筛选能与人膀胱癌EJ细胞特异性结合的小分子多肽,为膀胱癌的早期诊断和靶向治疗提供理论基础。方法:以膀胱癌细胞系EJ为靶细胞,人正常膀胱移行上皮细胞为吸附细胞,对噬菌体随机七肽库进行3轮体外减性筛选;随机挑取30个阳性噬菌体克隆,用ELISA法鉴定其与EJ细胞结合的特异性;对阳性噬菌体克隆进行测序分析;采用固相化学合成法制备EJ细胞导向肽及其对照肽;通过MTT试验和细胞损伤修复实验研究该膀胱肿瘤导向肽对EJ细胞生长的影响。结果:1、经过3轮“筛选-扩增-再筛选”,与EJ细胞特异结合的噬菌体得到高度富集,回收率也增加了近200倍。2、ELISA法鉴定结果显示,特异性结合系数≥2的阳性噬菌体克隆共有17个。3、测序结果显示,其中R2、R5、R9、R12、R16、R17、R21、R24八个噬菌体克隆的序列均为AVEAAKT,该肽段重复率最高且无同源性。4、制备了EJ细胞导向肽AVEAAKT及其对照肽,纯度达95%。5、MTT试验结果显示,该膀胱肿瘤导向肽及其对照肽的相对抑制率均低于30%,细胞损伤修复实验结果显示,单位时间内,各组细胞表现出相同的生长趋势,从而证实了该膀胱肿瘤导向肽对EJ细胞的生长几乎无影响。结论:本实验利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人膀胱癌EJ细胞特异性结合的小分子多肽AVEAAKT,并证实了该多肽对EJ细胞的生长几乎无影响。经查该肽段与已知蛋白尚无同源性,因此它很有可能为膀胱癌的早期诊断和靶向治疗提供新的思路。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：

山西医科大学硕士学位论文结 果1.细胞培养人移行性膀胱癌 EJ 细胞和正常膀胱黏膜上皮细胞常规培养于含 1%双抗、10%FBS 的 RPMI-1640 培养液中，在普通光学显微镜下观察可见细胞贴壁生长，状态良好，细胞膜完整、胞浆饱满，EJ 细胞多呈梭形(图 1)，人膀胱正常上皮细胞多呈不规则形(图 2)。

山西医科大学硕士学位论文结 果1.细胞培养人移行性膀胱癌 EJ 细胞和正常膀胱黏膜上皮细胞常规培养于含 1%双抗、10%FBS 的 RPMI-1640 培养液中，在普通光学显微镜下观察可见细胞贴壁生长，状态良好，细胞膜完整、胞浆饱满，EJ 细胞多呈梭形(图 1)，人膀胱正常上皮细胞多呈不规则形(图 2)。

图 3. ELISA 法鉴定噬菌体克隆与 EJ 细胞的结合情况菌体单链 DNA 的测序及分析 17 个阳性噬菌体的 DNA 测序结果显示，R2、R5、R9、R12、R24 八个噬菌体克隆的序列均为 AVEAAKT（图 4），R6、R20、隆的序列均为 SILPVTR，R11 噬菌体克隆测序失败，其他噬间无重复（表 2）。登录 NCBI/BLAST 网站，选择 protein b析，结果显示，AVEAAKT 与现有的基因和蛋白质无同源性。R1R2R3R4R5R6R7R8R9R10R11R12R13R14R15R16R17R18R19R20R21R22R23R24R25R26R27R28
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本文编号：2841196