胞苷脱氨酶在膀觥尿路上皮癌中的表达情况及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2020-10-15 11:12

　　 目的1、从膀胱癌细胞株中筛选出与膀胱癌进展相关的高表达基因；2、探讨胞苷脱氨酶(cytidine deaminase, CDA)在膀胱尿路上皮癌中的表达情况,并研究CDA与临床病理参数及预后的关系；3、通过体外实验研究CDA对膀胱癌细胞侵袭能力、干性能力的影响。方法1、应用transwell法建立膀胱癌5637细胞系低侵袭能力(5637-NM)和高侵袭能力(5637-HM)细胞株,通过芯片检测不同侵袭能力细胞株中差异表达基因,分析后确定研究对象。2、应用实时定量PCR (RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Weatern blot)分别检测10对膀胱尿路上皮癌组织及其癌旁正常尿路上皮组织中CDA的表达情况；通过GEO数据库分析膀胱尿路上皮癌组织及正常尿路上皮组织中CDA的表达情况；应用免疫组织化学染色技术(immunohistochemistry, IHC)检测30例膀胱尿路上皮癌组织中CDA的表达情况,应用统计学方法分析其表达量与临床病理参数之间的关系,以及对患者预后的影响。3、体外实验中,应用siRNA干扰膀胱癌5637 HM细胞株中CDA的表达。通过transwell实验研究其对膀胱癌细胞侵袭能力的影响；通过流式细胞术、成球实验检测其对膀胱癌细胞干性能力的影响。结果1、芯片结果显示CDA等基因在高侵袭能力膀胱癌细胞系中异常高表达,CDA被确定为研究对象。2、RT-qPCR组10对膀胱癌组织及其癌旁正常尿路上皮中,7对(70%)膀胱癌组织中CDA的表达量高于其癌旁组织,2对(20%)无明显变化,仅1对(10%)下降。Weaternblot组10对膀胱癌组织及其癌旁正常尿路上皮中,8对(80%)膀胱癌组织中CDA的表达量高于癌旁正常尿路上皮组织中的表达量。GEO数据库中,CDA在肌层浸润性膀胱癌的患者亚群中呈高表达。IHC组30例膀胱癌组织中CDA的表达与膀胱癌肌层进展与否有关,生存分析结果显示,CDA高表达的患者总体生存率低于CDA低表达的患者,提示CDA可能会成为膀胱癌的预后指标。3、体外实验显示,CDA下调后,膀胱癌侵袭能力显著减弱；干性相关标志物CD44,HMGA2, SOX-2等有下调趋势。流式细胞术和成球实验证实CDA的缺失会减弱膀胱癌细胞的干性能力。提示CDA可能通过改变膀胱肿瘤细胞的干性,进而影响肿瘤侵袭转移的能力。结论1、膀胱尿路上皮癌中CDA异常高表达,且与肿瘤浸润程度相关,提示CDA可能参与了膀胱癌的发生和发展,是一个新的肿瘤标记物,并有助于膀胱癌的预后评估。2、体外实验证实CDA下调可以减弱膀胱癌细胞的干性能力,抑制膀胱癌细胞的侵袭能力。
【学位单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：

东南大学硕±学位论文??无明显变化，无明显下降组。提示ＣＤＡ可能是膀腕癌的癌基因。详见图２－１－Ｂ。??１．３?ＧＥＯ数据库中ＣＤＡ在肌层浸润性膀脱癌中商表达??检索ＧＥＯ数据库，探索ＣＤＡ在膀脱癌及膀腕正常组织中的表达情况，通过??对编号为ＧＳＥ３１６７／２０５６２７＿ａｔ的探针结果进行分析，我们发现ＣＤＡ在正常尿路上??皮（Ｎｏｒｍａｌ?Ｕｒｏｔｈｅｌｉｕｍ?Ｍｕｃｏｓａ）、原位癌（ＣＩＳ）、浅表性膀脫癌中的表达并无??差异，但ＣＤＡ在肌层浸润性膀腕癌的亚群中呈高表达（见图２－１－Ｃ），且这种高??表达相对于浅表性膀胁癌具有统计学差异（Ｐ〈〇．?０５）。??ＡＣ?．．．巧口??ＣＤＡ?ｓ????化?品方户逆Ｓ???心猶５???Ｓ?３５．?Ｔ３?＾?下??－Ｓ?—；?Ｉ??臺?＊?Ｉ?５?ｒ＊－｜??Ｋ巧ｉ?■?．?Ｉ、换??重６下?Ｔ２ｂ?Ｉ?—至?乌吕百百里巧ＵＪ??妄?４－?—＾?Ｉ?１?Ｔ化??????????ｒＪ??？２?Ｔ２，?瞻■?，?■?—Ｎｅｒｔｉｘｔ?说?ＶｔＢＣ??茫?ｏＳ＾ｏｌｏＭｃｉｉｏｌｏｔｏｉ?一化－ｗ??！Ｕ?ｆＵ?ｗｊ?Ｕ?Ｕ?Ｕ?＾?ｆｌ］?＜Ｎ．，?ｗ。ｗ？巧（？？ｗ?（＂？■々州－巧??０￥?ＯＳ?的?０４?ＯＪ?１０?０７?０９?０２?０，??Ｂ?＿〇Ｌ?＿Ｑ２＿?＿０３＿?Ｍ?Ｑ５＿?＿０６＿?＿〇Ｌ?〇８?０９＿?１０??ＮＴＮＴ?ＮＴＮＴＮＴＮＴ?ＮＴ?ＮＴＮＴＮＴ??ＣＤＡ?＊ｗ？?ｍ０ｉｍ?■?／－ｉ－？?＊＇？?？

表达没有明显改变。同时，我们检测ＡＬＤＨ１Ａ１、ＣＤ４４、ＨＭＧＡ２、ＫＬＦ４、Ｓ０Ｘ－２??等肿瘤干性相关蛋白的表达，结果显示ＣＤ４４、ＨＭＧＡ２、Ｓ０Ｘ－２在ＣＤＡ敲降株??里表达有下降趋势。详见图３－２。??５６３７?ＨＭ??ｓｉＮＣ??ＣＤＡ?．??Ｅ－Ｃａｄｈｃｉｉｎ?＂禱綱畴麵錄??Ｎ－Ｃａｄｈｅｉｉｎ?？??Ｖｉｍｅ口ｔｉ口?善一Ｆ?ｍｍｍｍ?ｍｍｍｍ??ＡＬＤＨｌ?編圓辭卿咖撕痛嚇寒??ＣＤ４４?＾?ｉｌＭｌ??ＨＭＧＡ２補難翁譜伊赡??１／１?ＣＡ?，化?１?叫―４ＷＷＩＩＷ—，??．．…－＂ｌｌｔｍｉｉｍｍ＇?峽??Ｓ０Ｘ－２?ｍｍ?ｍｍｍ??（Ｊ－Ａｃｔｉｎ??图３－２．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ验证巧Ａ对膀脫癌细施ＥＭＴ、干性相关标志物表达的影响??随后，通过流式细胞技术，我们检测了?ＣＤＡ敲降株和对照株里ＡＬＤＨ１Ａ１、??ＣＤ４４阳性表达的情况。结果显示，ＣＤＡ敲降株的ＡＬＤＨ１Ａ１阳性率明显降低，??而ＣＤ４４的阳性率稍有下降。提示ＣＤＡ下调会引起膀脫癌细胞株干性能力显著??下降。详见图３－３，图３－４。??３８??

困３－４．流式细胞技术检测５６３７?ＨＭ细胞在巧降ＣＭ后细化表面标志ＣＤ４４的阳性比率??成球实验是较为经典的从细胞学水平反巧肿瘤细胞干性能刀的实验，能反峽??细胞总体的干性维持能力。在相同环境和时间条件下，可见敲降ＣＤＡ后，膀脫??癌细胞的成球体积明湿小与对照组，具有统计学差异。＜化０５）。提示ＣＤＡ表??达的下降能相应地减弱肿瘤细胞的干性能力。????５６３７?ＨＭ???ｓｉＮＣ?Ｓｉｌ＃?Ｓｉ２＃?，＂，＂＂??２〇〇．?＾２００ｕｍ??ｍ?２０ＣＭ００ｕｎ??咖曲曲：；，？－－極??ＢｉＳＩＭ?ｉＳｉｉｆｌＶ?。編…＂ａ??围３－５．成巧实验检验ＣＭ对膀化痛细胞干住能力的巧喃??
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 韩苏军;张思维;陈万青;李长岭;;中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析[J];癌症进展;2013年01期

本文编号：2842099