miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学特性的影响

发布时间：2020-10-18 03:14

　　 Pde4d基因位于小鼠13号染色体上,其编码产物PDE4D(磷酸二酯酶4d)可以特异性降解c AMP,因而细胞的生命活动中发挥重要作用。miR-1904定位于小鼠Pde4d第8内含子内,是一种内含子micro RNA。鉴于目前对miR-1904靶基因及功能研究较少,本论文以miR-1904为研究对象,分析了其在小鼠肝癌细胞中的表达及与宿主基因Pde4d的靶向关系,并进一步研究了miR-1904对Hepa1-6细胞生物学行为的影响。首先本文鉴定了miR-1904与宿主基因Pde4d之间的靶向关系。首先在Hepa1-6细胞转染miR-1904 mimics,外源性上调miR-1904,定量PCR和western blot检测显示Pde4d的m RNA和蛋白质水平都出现了显著性下调;而转染miR-1904 inhibitor后Pde4d表达出现显著性上调。随后双荧光素酶报告实验和挽救实验进一步证明Pde4d是miR-1904的靶基因。其次本文研究了miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学表型的影响。在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中上调和抑制miR-1904的表达,检测到miR-1904抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭。细胞周期和细胞凋亡实验结果进一步证实了miR-1904是通过促进细胞凋亡而并非改变细胞周期来影响细胞增殖的。体内成瘤实验表明过表达miR-1904的肿瘤无论是生长速率还是肿瘤质量都出现显著性下降,说明miR-1904具有肿瘤抑制子的功能。综上所述,本研究验证了Pde4d是miR-1904的靶基因之一,miR-1904表达上调对小鼠肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成和体内成瘤能力具有抑制作用,并促进细胞凋亡。说明miR-1904可能作为抑癌miRNA在肿瘤发生和发展中起到作用,为进一步阐明miR-1904的生物学功能奠定了基础。
【学位单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.7
【部分图文】：

第 1 章 绪 论题背景和研究目的及意义课题背景及来源e4d（磷酸二酯酶 4d）基因位于小鼠 13 号染色体长臂上(如图 1-1)，SC 浏览器得知，该基因共具有 17 个外显子，基因长度达 1.31Mb， EST 以及转录本。该基因的编码产物 PDE4D 可以特异性降解第在细胞生命活动中具有重要作用[1]。iR-1904 位于 Pde4d 第 8 内含子，通过生物信息学网站检索 miR-190仅在小鼠中存在[2]。越来越多的研究和实验表明，内含子 miRNA 一主基因的功能，在生物体生长发育等生命活动中起到作用[3]。本研究iRNA 和宿主基因的一般规律，并通过检索相关生物信息学网站04 的靶基因之一很可能是它的宿主基因 Pde4d。随后本实验室黄治双荧光素酶报告系统实验，确定了 miR-1904 与 Pde4d 的靶向关系[

癌细胞中作用的分子机制，对于理解肝癌的发病、发展和转移机制以及未来的床治疗具有重要意义。1.2 Pde4d 的研究进展1.2.1 Pde4d 的表达调控Pde4d 在小鼠胚胎发育早期和中后期具有不同表达趋势。在八细胞之前，Pde的表达逐渐降低。在小鼠 2 细胞时期表达量最高，随后 Pde4d 的表达逐渐下降待发育至囊胚阶段时，表达量最低。在小鼠胚胎胚胎发育 E9.5 天后，该基因随胚胎发育表达逐渐升高。Pde4d 在 E9.5-E18.5 全胚胎中的表达水平如图 1-2 所示从 E9.5 到 E15.5 天时 Pde4d 表达逐渐升高，在 E15.5 天时，该基因的表达量最高发育至 E18.5 天，Pde4d 的表达量则稍有下降。对 E15.5 天胚胎各组织器官进行量 PCR，发现在 E15.5 胚胎各脏器中肝脏中表达量最高，推测 Pde4d 可能在小肝脏中发挥作用[4]。a） b）

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文行后续的加工过程中。EXP5 发挥其功能依赖与 RAN-GTP 相互作用形成结构域个复合体内部具有正电荷，Pre-miRNA 本身带有负电荷，通过静电作用相互，将 Pre-miRNA 从核孔复合体中运送到细胞质中。随后核酸酶 Dicer re-miRNA 进行切割，形成一个短的 dsRNA。经 Dicer 酶切割的 dsRNA 随后结一个以Argonaute蛋白为核心的复合体上，该复合体迅速将miRNA过客链移除留下成熟的导向链。最后成熟导向链 RNA与 Argonaute 蛋白作用形成了复合物 RNA 诱导沉默复合物 miRISC ，也叫做 RISC 复合体[26]。随后 RISC 复合体RNA 结合降解 mRNA，或占据空间位置抑制核糖体的结合，阻碍翻译的进行[27]
【参考文献】

相关期刊论文 前9条

1 赵静雯;陈国荣;吴慧光;;miRNA合成途径研究进展[J];中国畜牧兽医;2015年12期

2 吕桂帅;陈磊;王红阳;;我国肝癌研究的现状与前景[J];生命科学;2015年03期

3 张子兰;贾筱琴;;miRNA在肝癌发生与转移中的研究进展[J];现代肿瘤医学;2013年04期

4 张俊芳;张忠敏;赵鑫;刘爱明;郭洁洁;沈璐艳;王钦文;王闯;;磷酸二酯酶4抑制剂咯利普兰逆转慢性束缚应激诱导的大鼠抑郁和焦虑样行为[J];中国病理生理杂志;2012年10期

5 王汉旻;陈晓丽;叶好好;毕涌;潘东波;徐丽英;吴建波;黄海波;;磷酸二酯酶4D基因多态性与动脉粥样硬化血栓形成性脑卒中的关系[J];医学研究杂志;2012年04期

6 郑燕;魏金旺;盛媛媛;乔鹏;董琼珠;钦伦秀;;肝癌转移和预后相关的miRNA[J];分子诊断与治疗杂志;2011年05期

7 蔚洪恩;王春芳;张传森;;内含子microRNA和基因调控[J];山西医科大学学报;2010年08期

8 刘强;郑秀峰;辛永红;;miRNA研究进展[J];重庆医学;2009年15期

9 王苟思义;袁贤瑞;蒋星军;;新型microRNA—miR-34在肿瘤中的研究进展[J];生命科学;2009年03期

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1 黄治军;小鼠胚胎Pde4d的表达调控及其影响细胞增殖和迁移的研究[D];哈尔滨工业大学;2014年

相关硕士学位论文 前2条

1 陈双双;Pde4d与其内含子miR-1904及CGI之间的调控关系研究[D];哈尔滨工业大学;2017年

2 黄宝春;内含子miRNA反馈调节其宿主基因表达和功能的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

本文编号：2845720