结直肠癌靶向重组毒素rCCK8PE38适用病例的筛查方法研究

发布时间：2020-10-30 04:59

　　结直肠癌(CRC)是全世界的第三大癌症,该疾病的发生伴随极高的死亡率。目前,手术的治疗方法是最常使用的方式,且辅助以化疗、放疗可以将5年后患者总存活率提高20%至33%。然而,癌症治疗过程中的化疗抑制剂和放疗辐射对正常组织细胞产生强烈的破坏作用,并在细胞水平诱导复杂的反应。靶向药物为人类癌症疾病的治疗提供了新的机会。胆囊收缩素(CCK)为一种肽类的激素,它由两种分别在中枢神经系统和外周器官中产生活性的G蛋白偶联受体CCKAR和CCKBR介导,从而调节消化酶的分泌作用。其中,CCKBR已被证明在CRC中广泛表达,并且据报道,CCKBR蛋白在恶化癌症细胞的增殖过程中起重要的生物功能。然而,CCKBR的表达水平与CRC的临床病理参数之间的相关性并不十分清楚。本实验室前期构建了一种新型靶向重组毒素rCCK8PE38。实验结果表明,该重组毒素对CCKBR过表达的HCT-116结肠癌细胞产生良好的靶向杀伤毒性。经体内抗肿瘤活性实验证明,rCCK8PE38可以有效抑制CRC肿瘤大小。目前,该研究正在进行rCCK8PE38重组毒素的临床前研究。在进入临床研究之前,建立CRC靶向病例的筛查方法,有利于对rCCK8PE38适用病例进行针对性治疗。由于rCCK8PE38是针对CCKBR的靶向毒素,因此,我们采用荧光定量PCR和Western-blot分别建立CCKBR在基因水平和蛋白质水平的分子诊断方法,并通过细胞杀伤试验验证CCKBR表达量与rCCK8PE38靶向毒素的杀伤活性关系。细胞水平结果表明,CCKBR在多种CRC细胞系及胃癌细胞系中高表达,且基因水平和蛋白质水平检测结果基本一致;rCCK8PE38靶向重组毒素特异性靶向杀伤CCKBR高表达的结直肠癌细胞系,但对CCKBR高表达的胃癌细胞系不敏感;将CCKBR表达量与细胞系背景来源数据相结合发现,CCKBR表达量与性别、P53水平以及角蛋白水平相关;尽管细胞水平的试验从样本数量到反映类型并不能完全代替实际样本分析,但其结果对临床分析的方向提供了指示作用。通过病例标本检测对rCCK8PE38的筛查方法进行验证与优化。癌症病例结果显示,70例CRC患者癌组织中CCKBR阳性率及弱阳性率约为48.2%;CCKBR过表达易发生于男性、黏液癌和P53水平高于70%的CRC病例;组织原代分离结果证明,rCCK8PE38可以有效靶向CCKBR阳性CRC细胞并产生明显的肿瘤杀伤效果。此外,本研究探寻了rCCK8PE38的血浆微创诊断方法,研究结果表明,血浆检测较组织检测灵敏程度偏低,但阳性准确率较高,可以作为CRC组织检测技术的辅助检测手段。总之,rCCK8PE38靶向毒素可以特异性结合并杀伤CCKBR高表达的结肠癌肿瘤细胞及组织。该靶向毒素的适用病例筛查可以通过分析CRC患者性别、癌症组织学分类以及P53组化进行初筛,并结合血浆检测共同筛查rCCK8PE38的适用病例。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.34
【部分图文】：

结直肠癌,标志物