癌蛋白DEPDC1在A549肺癌细胞中的作用机制研究

发布时间：2020-11-07 18:03

　　 目的:DEP结构域蛋白1(DEPDC1)的异位表达与肺腺癌的不良预后密切相关,但是其作用及机制尚不明确。本研究拟检测DEPDC1在肺癌细胞中的表达水平,分析DEPDC1在肺腺癌细胞中的作用,并研究其机制。方法:采用蛋白免疫印迹方法检测DEPDC1在肺癌细胞系中的表达,筛选出DEPDC1高表达的A549细胞用于后续实验研究。在A549细胞中表达DEPDC1抑制因子miR-130a,随后检测A549细胞的增殖与凋亡。用CCK-8技术确定11R-DEP:611-628多肽的最佳作用浓度后,用5μM的多肽处理A549细胞,结合免疫荧光、流式细胞术等方法研究多肽处理对A549细胞增殖和凋亡的影响。用JNK抑制剂+多肽处理A549细胞,检测JNK在肺癌细胞中的功能。结果:DEPDC1在多种肺癌细胞中呈高表达状态;mi R-130a和11R-DEP:611-628多肽(5μM)均可抑制A549细胞增殖、促进其凋亡;11R-DEP:611-628多肽处理细胞后可提高A20转录水平,显著减少核内的NF-κB,促进JNK磷酸化。这些实验结果表明,DEPDC1可通过抑制A549细胞中A20的表达、调节NF-κB通路信号转导,从而抑制细胞凋亡。当用11R-DEP:611-628多肽处理A549细胞后,JNK被激活,发挥保护细胞的作用。结论:1、miR-130a和11R-DEP:611-628多肽可有效抑制A549细胞增殖、促进其凋亡;2、在A549细胞中,DEPDC1通过抑制A20表达,激活NF-κB发挥抗凋亡作用;3、在A549细胞中,抑制JNK活性可增强11R-DEP:611-628多肽的凋亡诱导效果。
【学位单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R734.2
【部分图文】：

结果.1 DEPDC1 在多种肺癌细胞株中表达根据文献报道，我们得知癌蛋白 DEPDC1 在肺癌组织中呈高状态[18]，为了进一步在体外研究 DEPDC1 作用机制，我们选取株常用的肺癌细胞株，即 H3255、HCC827、H1993、H1995 及 A5用 western blot 方法检测 DEPDC1 的表达水平。我们发现，DEPD这 5 种肺癌细胞株中均有表达，并且其在 H3255 和 A549 细胞株水平高于其他三种细胞株，考虑 A549 细胞为目前科研领域最为应用的肺癌细胞株，故我们选取 A549 细胞进行后续实验研究。

32图 2. miR-130a 过表达抑制 A549 细胞增殖并且诱导其发生凋亡。予以 A549 细胞转染miR-130a 表达质粒 72 h 处理。A 显微成像技术观察细胞形态。B 细胞计数。C qRT-PCR 技术检测 miR-130a 的转录水平。D 流式细胞术检测 A549 细胞的凋亡水平。E western blot 技术检测 DEPDC1 的蛋白水平。F qRT-PCR 技术检测 A20 的转录水平。** p < 0.01；*** p <

差异（图 3），并且其作用效果呈剂量依赖性。我们的实验数据提示，DEPDC1 通过与 ZNF224 形成复合物发挥其作用；此外，5 μM 的11R-DEP:611-628 多肽可有效抑制 A549 细胞增殖，并且具有统计学意义，因此，我们选取 5 μM 为后续实验的干扰多肽最佳药物作用浓度。
【参考文献】

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2 王心睿;杨红;廖之君;;DEP结构域的结构与功能[J];生命的化学;2015年02期

3 平秦榕;颜汝平;王剑松;;膀胱癌早期诊断方法的临床价值[J];医学与哲学(B);2015年03期

4 汤钊猷;;肝癌研究的变迁与趋势[J];临床肝胆病杂志;2014年03期

5 何龙霞;糜燕;张春冬;张莹;蔡伟;王义涛;卜友泉;朱江;;沉默DEPDC1基因表达对鼻咽癌细胞系HNE-1生长和细胞周期的影响[J];中国细胞生物学学报;2014年03期

6 郑莹;吴春晓;张敏璐;;乳腺癌在中国的流行状况和疾病特征[J];中国癌症杂志;2013年08期

7 潘春鹏;鲍国清;施敏敏;詹茜;祝哲诚;邓侠兴;陈皓;彭承宏;沈柏用;;DEPDC1基因在胰腺癌的表达及其siRNA对胰腺癌细胞的影响[J];外科理论与实践;2013年03期

8 王晓江;廖之君;林德馨;;DEP结构域的功能研究进展[J];医学综述;2011年12期

9 张文玲;周艳宏;肖岚;范松青;曾朝阳;李小玲;武明花;李桂源;;鼻咽癌分子标志物研究[J];生物化学与生物物理进展;2008年01期

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本文编号：2874297